Termolabil uracil-DNA glikozilaz (UNG) fermentlari - PCR va NGS namuna tayyorlashda dUni olib tashlash uchun yuqori spetsifik, DNK sifatini nazorat qilishni yaxshilaydi

Tavsif

Uracil-DNA Glycosidase (UNG), Termolabil E. coli-da rekombinant protein, dengiz bakteriyasi orqali olindi. Enzim uracil-glikosidik bondsini U-DNA da faollashtiradi va uracilni olib tashlaydi, shuningdek, DNA-da alkaliga hassas abaz site yaratadi. Enzim RNA va uracilning yo'qligi natijasida DNA-da faol emas. Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Termolabil metal ionlari talab etmaydi va EDTA mavjud bo'lganda to'liq faol hisoblanadi.

Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Termolabil osoni dUTP bilan birga ishlatilishi, avvalgi DNA sintez reaksiyalaridan qolgan PCR kontsimatsiyasini olib tashlash uchun ishlatilishi mumkin. PCR mahsulotlarini zayiflashishga qarshilik qilish uchun PCR reaksiya mixida dTTP ni dUTP bilan almashtirish kerak. Keyingi PCR reaksiya mixlari PCRdan oldin Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Termolabil bilan oldindan muqobilashtirilishi kerak, chunki urasil yopiq DNA ni zayiflashtiradi. Asliy DNA da urasil mavjud emas, shuning uchun usul orqali namuna zayiflanmaydi.

Manba: Recombinant E. coli

Konsentratsiya va hajmi: 1U/μL

Ilovalar:

qPCR va Digital PCR: Avvalgi PCR mahsulotlaridan urasilni olib tashlash, keyingi reaksiyalardagi qayta kattalashtirishni oldini oladi, misollarining sensitivligini va spetsifikasini oshiradi.

Keyingi Dorixona Sekvenslashi (NGS): Suddalikni yaxshilash va fon shumini kamaytirish uchun contaminating DNA molekulalaridagi urasil bazalarini olib tashlashda NGS namuna tayyorlash ish jarayonining muhim komponenti.

Jinoyat tadqiqotida ishlatiladigan uslub: Jinoyat materialidagi DNA ning ichki miqdorini aniq va qadrlanuvchi yo'qlashni ta'minlaydi, haqiqiy to'g'irlashni kamaytirish orqali.

Metilatsiya aniqlash: Bisulfit o'zgarishi usullari bilan birga, UNG muamalasi metilaytsirilmagan sitozingizni urasilga aylantirilganidan so'ng olib tashlashni ta'minlaydi, bu esa metilatsiya analizini osonlashtiradi.

Taqoslov ajratish: Uratsilingiz turib bo'lgan yoki pozitsiyalangan DNA ni azolash orqali DNA ni tozalashga yordam beradi, shuning uchun maqsadli DNA sekvensining tozaqligi yaxshilanadi.

Termolabil Uratsil-DNA Glikozilaz enzim molikulyar biologlar va himoyalangan nuklein kismlar asosidagi eksperimentlarda ishlagan iqtidorlarga mustaqil vosita hisoblanadi, DNA namunalarning butunligi ustida yuqori darajada kontrollarni taqdim etadi va nazariy natijalarini buzadigan istisnai artefaktlardan xafa qiladi.

Vahidning belgilash usuli

Bir vahid 37°C temperaturada 60 minut ichida to‘g‘ri tartibda 1μg tozalangan bitta jihatli urasil turib bulgan DNA ni butunlay zayiflashtirish uchun talab qilinadigan Uracil-DNA Glycosylase (UNG) miqdori sifatida aniqlanadi.

Saqlash bufferi

20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(h/h) Tween-20, 0.5%(h/h) NP-40, 50%(h/h) glicerol.

Sifatni tekshirish

SDS page bo'yicha tozalik>99%

Endonuklease, Nickase, Exonuklease va RNase soliqmasi yo'q.

Issiq bilan faollikni yo'qotirish

50°C uchun 2 daqiqa

Reaksiya temperaturasi

20~37°C uchun 10 daqiqa.

Ishlatiladigan miqdor

Har bir 50ul reaksiyada 0.1~1U UNG enzymi.

Yetkazib berish va saqlash

-20°C da saqlang, gel maydoni bilan yetkazib bering.