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Enzimi pcr e rt pcr

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Enzima termomobile uracil-DNA glicosilasi (ung) - altamente specifico per la rimozione del du nella preparazione del campione pcr e ngs, migliorando il controllo della qualità del DNA

  • Introduzione
Introduzione

Descrizione

L' enzima idrolizza i legami urasi-glicosidici all' u-DNA in DNA a singolo e doppio filamento, escludendo l' uracile e creando siti abascici sensibili agli alcali nel DNA. L' enzima è inattiva sull' RNA e sul DNA nativo, senza uracile.

Per rendere i prodotti di pcr suscettibili di degradazione, il dttp deve essere sostituito con dutp nel miscuglio di reazione pcr. Le successive miscele di reazione pcr devono essere pretrattate con uracil-dna glicosilasi (ung), termomobili prima di pcr per degradarne


fonte: E. coli ricombinante


concentrazione e dimensione: 1 u/μl


applicazioni:

qpcr e pcr digitale: eliminazione dell'uracile dai prodotti precedenti di pcr per evitare la reamplificazione nelle reazioni successive, aumentando la sensibilità e la specificità del test.

sequenziamento di nuova generazione (ngs): componente critico nei flussi di lavoro di preparazione del campione ngs per rimuovere le basi di uracile dalle molecole di DNA contaminanti, migliorando la precisione della sequenza e riducendo il rumore di fondo.

analisi forense: consente di rilevare in modo più preciso e affidabile tracce di DNA nei campioni forensi riducendo al minimo la contaminazione incrociata.

rilevazione della metilazione: in combinazione con i metodi di conversione della bisulfite, il trattamento a base di ung assicura la rimozione delle citosine non metilate convertite in uracile, facilitando l'analisi della metilazione.

eliminazione degli inibitori: aiuta a purificare il DNA digerendo il DNA degradato o danneggiato contenente uracile, migliorando così la purezza delle sequenze di DNA bersaglio.

L'enzima termoalimentare uracil-DNA glicosilasi è uno strumento indispensabile per i biologi molecolari e i ricercatori impegnati in esperimenti sensibili basati su acidi nucleici, offrendo un controllo superiore sull'integrità del campione di DNA e riducendo gli artefatti indesiderati che potrebbero compromettere i


definizione di unità

una unità è definita come la quantità di glicosilasi di uracile-DNA (ung) necessaria per degradare completamente 1 μg di DNA purificato a un filo singolo contenente uracile a 37°C in 60 minuti.


buffer di stoccaggio

20 mm tris- hcl (ph8.0), 0,1 mm edta, 100 mm kcl, 1 mm dtt, 0,5% (v/v) tra 20, 0,5% (v/v) np-40, 50% (v/v) glicerolo.


controllo della qualità

Purezza > 99% per pagina di SDS

Nessuna contaminazione di endonucleasi, nicasi, esonucleasi e rnasi.


inattivazione termica

50°c per 2 minuti


temperatura di reazione

20°C a 37°C per 10 minuti.


quantità di utilizzo

0,1 - 1 u di enzimi ung per reazione di 50 ul.


spedizione e stoccaggio

conservare a 20°C, spedire con ghiaccio.


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