Enzyme thermolable Uracile-ADN glycosylase (UNG) - hautement spécifique pour l'élimination de l'ADN dans la préparation d'échantillons par PCR et NGS, améliorant le contrôle de la qualité de l'ADN

Description

L'Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Thermolabile est une protéine recombinante produite dans E. coli, issue d'une bactérie marine. L'enzyme hydrolyse les liaisons uracile-glycosidiques dans l'ADN simple et double brin contenant de l'uracile, excisant l'uracile et créant des sites apuriques sensibles à la base dans l'ADN. L'enzyme est inactive sur l'ARN et l'ADN natif exempt d'uracile. Comme l'Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Thermolabile n'a pas besoin d'ions métalliques, elle est pleinement active en présence d'EDTA.

L'Uracil-DNA Glycosylase (UNG), thermolabile peut être utilisée avec du dUTP pour éliminer les contaminations par 'carry over' PCR provenant de réactions de synthèse d'ADN précédentes. Pour rendre les produits de PCR sensibles à la dégradation, le dTTP doit être remplacé par du dUTP dans le mélange de réaction PCR. Les mélanges de réaction PCR ultérieurs doivent être prétraités avec l'Uracil-DNA Glycosylase (UNG), thermolabile avant la PCR pour dégrader l'ADN contenant de l'uracile. L'ADN natif ne contient pas d'uracile, de sorte que l'échantillon n'est pas dégradé par cette procédure.

Source : E. coli recombinant

Concentration et taille : 1U/μL

Applications:

qPCR et PCR numérique : Élimination de l'uracile des produits PCR précédents pour éviter leur réamplification dans les réactions suivantes, augmentant ainsi la sensibilité et la spécificité de l'analyse.

Séquençage de nouvelle génération (NGS) : Composant crucial dans les workflows de préparation des échantillons NGS pour enlever les bases uraciles des molécules d'ADN contaminantes, améliorant la précision des séquences et réduisant le bruit de fond.

Analyse médico-légale : Permet une détection plus précise et fiable des faibles quantités d'ADN dans les échantillons médico-légaux en minimisant la contamination croisée.

Détection de la méthylation : En combinaison avec les méthodes de conversion au bisulfite, le traitement par l'UNG assure l'élimination des cytosines non méthyées converties en uracile, facilitant ainsi l'analyse de la méthylation.

Élimination des inhibiteurs : Aide à purifier l'ADN en digérant l'ADN dégradé ou endommagé contenant de l'uracile, améliorant ainsi la pureté des séquences d'ADN cible.

L'enzyme Uracil-DNA Glycosylase Thermolabile est un outil indispensable pour les biologistes moléculaires et les chercheurs engagés dans des expériences sensibles basées sur les acides nucléiques, offrant un contrôle supérieur sur l'intégrité des échantillons d'ADN et réduisant les artefacts indésirables qui pourraient compromettre les résultats expérimentaux.

Définition de l'unité

Une unité est définie comme étant la quantité d'Uracil-DNA Glycosylase (UNG) nécessaire pour dégrader complètement 1 μg d'ADN simple brin purifié contenant de l'uracile à 37°C en 60 min.

Tampon de stockage

20 mM Tris-HCl (pH 8,0), 0,1 mM EDTA, 100 mM KCl, 1 mM DTT, 0,5 % (v/v) Tween-20, 0,5 % (v/v) NP-40, 50 % (v/v) glycérine.

Contrôle Qualité

Pureté >99 % par SDS page

Pas de contamination par des endonucléases, nickases, exonucléases et RNases.

Inactivation thermique

50°C pendant 2 min

Température de réaction

20~37°C pendant 10 min.

Quantité d'utilisation

0.1~1U d'enzymes UNG par réaction de 50ul.

Expédition et stockage

Stockez à -20°C, expédiez avec glace gel.