Termolabiilne uracil-DNA glükooslaas (UNG) ensüüm - väga spetsiifiline dU eemaldamiseks PCR- ja NGS-proovivalmistamisel, parandades DNA kvaliteedi kontrolli

Kirjeldus

Uracil-DNA Glykosülaas (UNG), Termoolabilne on rekombinantne prot eiin E. coli-st, merebakterist pärit. Enzyym hidrolüüsib uraciil-glykosiidseid sideid U-DNA-s ühe- ja kahejuhtmelises DNA-s, välja lõikates uraciili ja loomes alkaalisensitiivsed abasisid kohtad DNA-s. Enzyym on RNA-l ja natukevast, uraciil-vabas DNA-s aktiivne. Kuna Uracil-DNA Glykosülaas (UNG), Termoolabilne pole metallioonidele sõltuv, on see täielikult aktiivne EDTA olemasolus.

Uraciil-DNA Glikosülaas (UNG), Termoolabilne, kasutatakse dUTP-ga eelmiste DNA sünteesi reaktsioonide kontsentratsioonide „järelekanekate” likvideerimiseks. Et teha PCR tooted tuvastatavaks haitsetele reaktsioonidele, tuleb PCR reaktsioonimiksa dTTP asendada dUTP-ga. Järgnevad PCR reaktsioonimiksad peavad olema enne PCR pre-treata Uraciil-DNA Glikosülaasiga (UNG), Termoolabile, et degradiere uraciilisisese DNA-d. Originaalne DNA ei sisalda uraciili, nii et proovikontroll pole selle protseduuri käigus kadunud.

Allikas: rekombinantne E. coli

Konsoentratsioon ja suurus: 1U/μL

Rakendused:

qPCR ja Digitaalne PCR: Uraciili eemaldamine eelmistest PCR toodetest, et takistada neid järgmistel reaktsioonidel uuesti amplifeerida, mis suurendab analüüsi tundlikkust ja spetsifiitsust.

Järgmise põlvkonna järjestamine (NGS): Oluline komponent NGS näidispäringute töövoogudes, et eemaldada uraciilipüsteid kontamineerivatest DNA molekulitest, parandades järjestamise täpsust ja vähendades taustahalli.

Forensiline analüüs: Võimaldab täpsemat ja usaldusväärsemat jälkerohkemiste DNA plokkide tuvastamist forensilistes proovides, vähendades ristkontaminatsiooni mõju.

Metüülatsioonide tuvastamine: Bisulfiitkonversioonimeetoditega koos töötades tagab UNG-l üleminekumetüülatsioonideks teisendatud sitosiinide eemaldamise, mis võimaldab metüülatsioonianalüüsi.

Hambutajate eemaldamine: Aitab tühjendada DNA-ga seotud proovide hambutajaid uraciili sisaldavate degradeeritud või kahjustatud DNA digeerimise abil, parandades siht-DNA-jadade puhasust.

Termolaadne Uraciil-DNA-Glukoosaase on oluline tööriist molekulaarbioloogide ja teadlaste jaoks, kes tegelevad tundlike nukleiinhapepõhiste eksperimentidega, pakudes suuremat kontrolli DNA-proovi terviklikkuse üle ning vähendades ebatoimivaid artefakte, mis võivad mõjutada eksperimentaalset tulemust.

Ühikute defineerimine

Üksus on defineeritud kui see kogus Uraciil-DNA Glikosülaasi (UNG), mis on vajalik täielikult destrueerida 1μg puriteeritud ühekordsete spirali uraciilisisest DNA-d 37°C temperatuuril 60 minutis.

Hoidmispuhu

20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(v/v) Tween-20, 0.5%(v/v) NP-40, 50%(v/v) glycerol.

Kvaliteedi juhtimine

Puhtus >99% SDS page järgi

Ei ole endonuklease, nickase, exonuklease ega RNase kontamimeid.

Lahutamine soojusega

50°C 2 minutit

Reaktsiooni temperatuur

20~37°C 10 minuti jooksul.

Kasutamise maht

0.1~1U UNG enzyymi kohta 50ul reaktsioon.

Transpord ja salvestamine

Salvesta -20°C, transpordi geel jäiuga.