ٹھرمولیبل یوریل-ڈی این اے گلیکوسیلاز (آئی این جی) انزایم - پی سی آر اور این جی ایس سمپل تیاری میں dU کو ہٹانے کے لئے بالکل خاص، ڈی این اے کوالٹی کنٹرول میں بہتری

تفصیل

یوریل-ڈینی ای گلائکوسیلاز (UNG)، تھرمو لیبل ای کولائی میں بنایا گیا ایک بازگو پروٹین ہے، جو سمندری باکٹیریا سے حاصل کیا جاتا ہے۔ اس انزایم کا عمل یوراسیل گلائی کوسڈک بانڈز پر ہوتا ہے جو U-ڈینی ای میں یوراسیل کو نکال دیتا ہے اور ڈینی ای میں ایلکیلائی سینسٹو ایبیس سائٹس بنادیتا ہے۔ اس انزایم RNA اور اصلی، یوراسیل مفت ڈینی ای پر غیر فعال ہے۔ چونکہ یوریل-ڈینی ای گلائکوسیلاز (UNG)، تھرمو لیبل کسی میٹل آن کی ضرورت نہیں چاہتی، اس لئے اس کا کام EDTA کی موجودگی میں پوری طرح سے فعال ہے۔

یوریل-ڈینی ای جلاسی لیز (UNG)، ٹرمولیبلے کو dUTP کے ساتھ استعمال کیا جا سکتا ہے تاکہ پچھلی ڈینی ای جینتیس ریکشنز میں PCR 'carry over' ملوثات کو ختم کیا جا سکے۔ PCR پroucts کو نقصان پہنچانے کے قابل بنانے کے لئے، PCR ریکشن مکس میں dTTP کو dUTP سے بدلنا ضروری ہے۔ بعد کی PCR ریکشن مکس کو PCR سے پہلے Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، Thermolabile کے ذریعے پرتreatment کرنے کی ضرورت ہوتی ہے تاکہ uracil-wالی DNA کو نقصان پہنچایا جا سکے۔ نیٹیو DNA میں uracil نہیں ہوتا ہے، لہذا یہ sample اس طرح کے procedure سے نقصان نہیں پہنچتا۔

سرس: بازپید کردہ E. coli

Carthyat اور سائز: 1U/μL

استعمالات:

qPCR اور ڈجیٹل PCR: پچھلے PCR پroucts میں سے uracil کو ختم کرنے کے لئے، بعد کی ریکشنز میں دوبارہ amplification کو روکنے کے لئے، جس سے assay کی حساسیت اور خصوصیت میں بہتری آتی ہے۔

Next-Generation Sequencing (NGS): NGS sample prep workflows میں ایک حیاتی عنصر جو ملوث DNA molecules میں سے uracil bases کو ہٹانے کے لئے استعمال ہوتا ہے، جس سے sequence accuracy میں بہتری آتی ہے اور background noise کم ہوتا ہے۔

فورینزک تجزیہ: فورینزک نمونوں میں ڈی این اے کے ردیف مقدار کا زیادہ سے زیادہ درست اور موثق پتہ لگانے کے لئے عبوری آلودگی کو کم کرتے ہوئے مدد دیتا ہے۔

میٹھیلیشن کا پتہ لگانا: بائسالفارٹ کنورژن طریقوں کے ساتھ، یو این جی معاملے میں نا میٹھیلیٹڈ سایٹوسائن کو یوریل میں تبدیل کرنے سے چھوڑ دیتا ہے، میٹھیلیشن تجزیہ کو آسان بناتا ہے۔

رُکاوٹ کا ختم کرنا: یوریل والے ڈیگریڈڈ یا متاثرہ ڈی این اے کو پاک کرنے میں مدد کرتا ہے، اس طرح ہدف کے ڈی این اے تسلسل کی صفائی میں بہتری کرتا ہے۔

ذوب لیبل یوریل-ڈی این اے گلیکاسیلیز انzyme مولیکولر بیولوژسٹس اور شواهد پر مشتمل حساس تجربات کرنے والے ماخذ کے لئے ایک غیر قابل جدّوں اوزار ہے، ڈی این اے نمونوں کی سلامتی پر برتر کنٹرول پیش کرتا ہے اور تجرباتی نتائج کو تنخواہ دینے والے غیر مرغوب آرٹی فیکٹس کو کم کرتا ہے۔

یونٹ کی تعریف

ایک یونٹ کو اس مقدار کے طور پر تعریف کیا جاتا ہے جو 37°C پر 60 منٹ میں 1μg صاف single-stranded یوریل والے DNA کو پوری طرح سے نقصان پہنچاتی ہے۔

استوریج بفر

20mM Tris-HCl (pH8.0)، 0.1mM EDTA، 100mM KCl، 1mM DTT، 0.5%(v/v) Tween-20، 0.5%(v/v) NP-40، 50%(v/v) glycerol.

کوالٹی کنٹرول

SDS page سے پurity>99%

Endonuclease، Nickase، Exonuclease اور RNase کی کوئی ملوثت نہیں۔

گرما کی واسطے کم فعال

50°C پر 2 منٹ

ریکشن درجہ حرارت

20~37°C پانچھ مینٹ کے لئے۔

استعمال کی مقدار

50ul ریکشن کے لئے 0.1~1U UNG انزائمس۔

شپنگ اور ذخیرہ کرنا

-20°C پر رکھنا، گیل آئس کے ساتھ شپ کرنا۔