Termolabilni encim uracil-DNA glikozilaza (UNG) - zelo specifičen za odstranjevanje dU pri PCR in NGS pripravi vzorcev, ki izboljšuje nadzor kakovosti DNK

Opis

Uracil-DNA Glikozilaza (UNG), Termolabilna je rekombinantni protein v E. coli, iz morskega bakterija. Enzim hidrolizira uracil-glikozidične veze na U-DNA v eno- in dvojnosnicičnem DNA, izrezuje uracil in ustvarja alkalicno občutljive abezne lokacije v DNA. Enzim ni aktiviran na RNA in naravni, brez uracila DNA. Ker Uracil-DNA Glikozilaza (UNG), Termolabilna nimajo potreb po kovinskih ionih, je popolnoma aktivna tudi v prisotnosti EDTA.

Uracil-DNA Glikozilaza (UNG), Termolabilna, se lahko uporablja z dUTP za odstranitev PCR "prevzetih" onesnaženj iz prejšnjih reakcij sinteze DNA. Za ustvarjanje PCR izdelkov, ki so ranljivi za razgradnjo, je potrebno v mešanici PCR reakcije zamenjati dTTP z dUTP. Naslednje mešanice PCR reakcije morajo biti pred obravnavo s Uracil-DNA Glikozilazo (UNG), Termolabilno pred PCR, da se razgradi uracil-vsebujoča DNA. Prirodna DNA ne vsebuje uracila, zato vzorec ni po tej postopki ravnanju podvržen razgradnji.

Vir: Recombinant E. coli

Koncentracija in velikost: 1J/μL

UPORABE:

qPCR in Digital PCR: Odstranitev uracila iz prejšnjih PCR izdelkov za sprečasajanje ponovne amplifikacije v nadaljnih reakcijah, kar poveča občutljivost in specifičnost analize.

Naslednje generacije sekvenciranja (NGS): Ključni sestojek v delovnih postopkih priprave vzorcev NGS za odstranitev uracilnih baz iz onesnažujočih molekul DNA, kar izboljša točnost sekvenciranja in zmanjša ozadinski šum.

Forenzna analiza: Omogoča točnejše in zanesljivejše zaznavanje majhnih količin DNA v forenzni vzorci tako, da zmanjša krizno onesnaževanje.

Zaznavanje metilacije: V sklopu s metodami pretvorbe bisulfita zagotavlja UNG obravnavo odstranitev neometiliranih citozinov, ki so bili pretvorjeni v uracil, kar olajša analizo metilacije.

Odstranjevanje inhibitorjev: Pomaga počistiti DNA tako, da razgradi degradiranjo ali poškodovano DNA, ki vsebuje uracil, s čimer poveča čistoćę ciljnih DNA zaporedij.

Termodlabiva enzima uracil-DNA glikozilaza je nesmiselno orodje za molekularne biologe in raziskovalce, ki se ukvarjajo s občutljivimi poskusnimi eksperimenti na podlagi nukleinske kisline, ter ponuja izjemno nadzor nad čistoščino vzorcev DNA in zmanjšuje neželeno artefakte, ki bi lahko ogrozile rezultate poskusov.

Definicija enote

Enota je določena kot količina Uracil-DNA Glikozilaze (UNG), ki jo je potrebno za popolno razgradnjo 1μg očiščene enovrstične uracil-vsebujoče DNA pri 37°C v 60min.

Shrani v tamnici

20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(v/v) Tween-20, 0.5%(v/v) NP-40, 50%(v/v) glicerol.

Kontrola kakovosti

Čistota >99% po SDS strani

Brez onesnaženosti Endonukleaza, Nickase, Exonukleaza in RNase.

Toplotna deaktivacija

50°C za 2 min

Temperatura reakcije

20~37°C v 10 min.

Količina uporabe

0,1~1U UNG enzimov na 50 μl reakcije.

Prevoz in shranjevanje

Shranjujte pri -20°C, prevoz z gel ledom.