thermolabel uracil-dna-glycosylase (ung) enzym - zeer specifiek voor de verwijdering van du bij de voorbereiding van pcr- en ngs-monsters, waardoor de kwaliteitscontrole van DNA wordt verbeterd
- inleiding
inleiding
beschrijving
Uracil-dna glycosylase (ung), thermolabile is een recombinant eiwit in e. coli, afkomstig van een mariene bacterie. Het enzym hydrolyseert uracil-glycosidische bindingen bij u-dna in enkel- en dubbelstrengd dna, verwijdert uracil en creë
Om pcr-producten verdachtbaar te maken voor afbraak, moet dttp in de pcr-reactiemengsel worden vervangen door dutp. Vervolgende pcr-reactiemengsels moeten vooraf worden behandeld met uracil-dna-glycosylase (ung), thermolabel voordat pcr wordt gebruikt om
bron: recombinant e. coli
concentratie en grootte: 1 u/μl
toepassingen:
qpcr en digitale pcr: eliminatie van uracil uit eerdere pcr-producten om heramplificatie in latere reacties te voorkomen, waardoor de gevoeligheid en specificiteit van de test worden verhoogd.
Next-generation sequencing (NGS): een cruciaal onderdeel in de werkstromen voor de voorbereiding van ngs-monsters om uracilbasen te verwijderen van besmette DNA-moleculen, waardoor de nauwkeurigheid van de sequentie wordt verbeterd en het achtergrondgeluid wordt verminderd.
Forensische analyse: maakt het mogelijk om nauwkeuriger en betrouwbaarder sporen van DNA in forensische monsters te detecteren door kruisbesmetting te minimaliseren.
methyleringsdetectie: in combinatie met bisulfietconversie methoden zorgt de behandeling voor het verwijderen van niet-gemethyleerde cytosines die worden omgezet in uracil, waardoor de methyleringsanalyse wordt vergemakkelijkt.
removing van remmer: helpt bij het zuiveren van DNA door afgebroken of beschadigd DNA dat uracil bevat te verteren, waardoor de zuiverheid van de doel-DNA-sequenties wordt verbeterd.
Het thermolabiele uracil-dna-glycosylase-enzym is een onmisbaar hulpmiddel voor moleculaire biologen en onderzoekers die zich bezighouden met gevoelige nucleïnezuurgebaseerde experimenten, waardoor de integriteit van de DNA-monsters beter onder controle wordt gehouden en ongewenste artefacten worden vermind
definitie van eenheid
één eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid uracil-dna-glycosylase (ung) die nodig is om 1 μg gezuiverd enkelstrengig uracil-bevattend dna bij 37°c in 60 minuten volledig af te breken.
opslagbuffer
20 mm tris-hcl (ph8.0), 0,1 mm edta, 100 mm kcl, 1 mm dtt, 0,5% (v/v) tween-20, 0,5% (v/v) np-40, 50% (v/v) glycerol.
kwaliteitscontrole
zuiverheid> 99% per sds-pagina
geen besmetting van endonuclease, nickase, exonuclease en rnase.
warmte-inactivatie
50°c gedurende 2 minuten
reactietemperatuur
20 tot 37°C gedurende 10 minuten.
hoeveelheid gebruik
0,1 tot 1 u ung-enzymen per reactie van 50 ul.
verzending en opslag
-20°C bewaren, met gel ijs verzenden.