Ir-Ruolo Versatili ta' Pfu DNA Polymerase fil-Biologija Molekulari

I. Introduzzjoni għal PFU DNA polimeraza

Pfu DNA polymerase issir oriġinalment li wieħed minn iż-żiljet aħjar fil-biologija molekulari, prodott skont il-bakterju hyperthermophilic Pyrococcus furiosus. L-enzim qiegħed jipperdepopolarizza ħafna għall-fidelità u processivity tagħha li jagħmluha ħafna utili fit-tfalit varjati, mill-amplifikazzjoni PCR għal reazzjonijiet sekwenċja. Komparat amb Taq polymerase li hija prone għall-errijor, Pfu DNA polymerase tista' tkopja DNA b'sidjet ikbari, minimizzandi konsiderabbilment ir-rewoluzzjoni tal-mutazzjonijiet.

II. Propprietajiet ta' Pfu DNA Polymerase

Ħadd tipiċ li jidistinju l-Pfu DNA polymerase huwa thermostabilità. Tħallief attiv għal tempiraturi b’għoli 95°C, li jagħmlu u s-sib il-mista’ għall-użu fi applicazzjonijiet li tħtieġu stabilità b’tempiraturi għoli, kif long PCR u nested PCR. Żgħar minn dawn, din is-sinfizma tintloq 3' lejn 5' exonuclease activity li tigħdidu fid-ideljan tagħha. F’dan mod, meta b’sabjiġġ miftuljin jkunu miżjun fit-trasċenzi, l-Pfu DNA polymerase tista’ tirreġistrax u tissigluhom biex l-prodotto finali jkun ħafna pross fuq il-modell orignali stess.

III. Applicazzjonijiet tal-Pfu DNA Polymerase fil-Bioloġija Molekulari

Drittajn tèkniki tal-biologija molekularja jiprefiru l-istwar ta' Pfu DNA polymerase għax jagħmlu xi proprjetajiet distinkti li jgħidu. L-avvenjanza elevata li jiġi provista minn din l-enzima fil-PCR hija ġewwa partiċolarmenti importante meta tigħżel akkuratezza elevata, e.g., fil-kloning jew meta jogħġbu tempi riċhiema għall-sequencing. Il-proċessivitajiet tiegħu wkoll tpermettu rriproduzzjoni effiċjenti ta' DNAs kbar li huma meħtieġa għall-istratiji ta' amplifikazzjoni ta' genome intieri bissieru fuq il-kloning jew oħrajn metodi skont SDA/LMDA teknoloġija mit-tikenu tal-pyrosequencing skont Roche’s GS FLX sistema]. Fost minn PCR, għandhom jekk jogħġbu użu tagħda Pfu DNA polymerase, skont esempju, fil-mutagenesi diretti skont li idukament ta' kopji aċċuratati jpermettu l-introduzzjoni ta' xi modifiki skont is-siġuri f'mod li ma jkunu xejn sbagli.

IV. Analisi Komparativa ma’ DNA Polymerasi Oħra

Pfu DNA polymerase għandha kapacità aħjar tal-korrezzjoni ta' ġewwiem u resistentza għall-inċieni minn DNA polymerasi oħraj kif Taq jew Vent. F'dawk li jkunu differenti minn Pfu, li hija aktar żgħara u aħwar, Taq ma tixtieq l-funzjonalità tal-korrezzjoni, ikollox mhux adekvata għall-applikazzjonijiet ta' fideltà alta. Similment, bħall-enzimi oħraj ta' fideltà alta kif vent DNA polymerase, ma tistennaš il-nivell stess ta' inċieni li Pfu, ikollox jrenduha aktar mhux adekvata għall-użu fil-reakjoni biex tempiraturi alti.

V. Safi u Konsiderazzjonijiet f’Użu ta' Pfu DNA Polymerase

Jekk jkollhom PFU DNA polimeraza jist aħjar mal-ġieħ il-mudawwin li jgħidu ma’ dan. Għal esempju, l-attivta’ ta’ korrezzjoni tal-prova tiegħu tista’ tibdil f’produzzjonijiet ġoħreni fl-reakjoni PCR magħrufa b’li polimerazzjonijiet sbagljati. Ovret, l-perfurmanza optima tal-Pfu DNA polimeraza tigħdem reċepieni strengwi tar-riżultati kif divalent cations u pH li għandhom jiġu mregolati b’modi altament. F’dak li jagħmlu użu minn din is-sin, tista’ tkun affar preċju speċjalment meta tinqaslu proġetti kbir jew liqem tagħtielikament konstranzi budžitarji li jkunu mhux minbid mill-riċerka.

VI. Perspektivi u Avanzamenti fuq il-Futuru

Varjanzi ġodda ta’ Pfu DNA polimeraza li jkunu aħjar jew biex ikunu aktar ekonomiċi jistgħu jkunu evoluti skont it-tehnoloġija. L-ingegnerija ta’ protiena tista’ tiffokussa fuq inċrements tas-suffiċjenza jew estenzi tal-funktionalità tagħha għall-metodi ġodda ta’ bioloġija molekulari li jgħixxu. Fi żied, l-intendiment aħjar ta’ wieħed jekk Pfu DNA pol jerġa tibdil potenzjali mhux mitnebbja għall-użu fil-nanoteknoloġija jew fid-dawl ta’ bioloġija sintetika.

VII. Konklussjoni

Għalik konkluda, Pfu DNA polymerase hija ħaddiema għat-tiflologija molekulari bħala rezultat tal-fideliċità u s-sidurieta tiegħi. Dan jifisserha minuri għall-iskienziati li jkunu jipperfunu varjazzjonijiet ta' riċerka kif ukoll għall-użu dijagostiku bħala rezultat tal-riproduzzjoni tal-sequenzi tal-DNA b'mod preciż. Skont li l-iskienzjati jagħmlu avanci fit-tiftix fil-genetika, l-importanza ta' l-użu ta' tooli kif ukoll Pfu DNA polymerase li huma kkoncetti jistgħu jogħġbnu u jivverkuhom aktar ħaddiem għall-iskienza bioloġika tal-presenti u tal-ġejjer.