אנזים UNG (Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase) - ספציפי מאוד להסרת dU בתהליך PCR ובהכנה של דגימות NGS, משפר את הבקרת על איכות ה-DNA

תֵאוּר

אורציל-דנה גליקוזילאז (UNG), תרמואלבי הוא חלבון רקורסנטי שמופק באקורי, מחיידק ימי. האנזים מפרק את הקשרים הגליקוזידיים של אורציל ב-DNA חד שרשרת וכפולה, מסיר אורציל ויוצר אתרים אבסיסיים חסרי בסיס שרגישים לאלקלים ב-DNA. האנזים אינו פעיל על RNA ועל DNA טבעי ללא אורציל. מאחר ואורציל-דנה גליקוזילאז (UNG), תרמואלבי אינו זקוק לבני ברזל, הוא נשאר פעיל לחלוטין גם בהימצאות EDTA.

אינזים UNG (Uracil-DNA Glycosylase), תרמואלבי, יכול לשמש יחד עם dUTP כדי להיפטר מזיהום 'carry over' ב-PCR מתגובות DNA קודמות. כדי להפוך את תוצרי ה-PCR לתלויים בהרס, יש להחליף את dTTP ב-dUTP בתערובת ה-PCR. תערובות PCR עתידיות צריכות להופעל מראש באינזים UNG (Uracil-DNA Glycosylase), תרמואלבי, לפני ה-PCR כדי להרוס DNA המכיל אורציל. DNA טבעי אינו מכיל אורציל, ולכן המדגם לא יוסדר על ידי התהליך הזה.

מקור: E. coli רקורסנטי

עומק וגודל: 1U/μL

יישומים：

qPCR ו- Digital PCR: הסרת אורציל מתוצרי PCR קודמים כדי למנוע שחלוף מחדש תגובות לאחר מכן, מה שמעלה את רגישות והספציפיות של האנאליזה.

שכפול הבא (NGS): חלק קריטי בעיבוד מדגמי NGS כדי להסיר בסיס אורציל מ-DNA זוהם, מה שמשפר את דיוק ההשכפול ומפחית רעש רקע.

ניתוחליזה פורנסית: מאפשרת זיהוי מדויק ואמין יותר של כמויות קטנות של DNA בדגימות פורנסיות על ידי הפחתת תזוזת חומרים בין דגימות.

זיהוי מתילציה: יחד עם שיטות המרה של ביסולפיט, טיפול ב-UNG מבטיח את הסרת cytosines לא מתילטים שהופכים ל-uracil, מה שמקל על ניתוח מתילציה.

הסרת עכברים: מסייעת בהעתקה של DNA על ידי העיכול של DNA מפורק או ניזוק המכיל uracil, מה שמעלה את טהרת סדרות ה-DNA המבוקשות.

האנזים Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase הוא כלי חיוני לביאולוגים מולקולריים לחושבים ולחוקרים העוסקים בניסויים מבוססי חומצות נוקלאיות רגישים, והוא מציע שליטה יוצאת מן הכלל על שלמות דגימות ה-DNA והופכת את התוצאות הניסיוניות פחות חשופות לפירורים בלתי רצויים.

הגדרת יחידה

יחידת אחת מוגדרת ככמות של Uracil-DNA Glycosylase (UNG) הנחוצה כדי לפצל לחלוטין 1μg של DNA חד שרשרת המכיל אורציל בטמפרטורה של 37°C במשך 60 דקות.

מכלית אחסון

20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(v/v) Tween-20, 0.5%(v/v) NP-40, 50%(v/v) גליצרול.

בקרת איכות

נقاء>99% לפי SDS page

אין זיהום מאנדונוקלאז, ניקאז, אקסונוקלאז ו-RNase.

השבתת פעילות בחום

50°C למשך 2 דקות

טמפרטורת תגובה

20~37°C ל-10 דקות.

כמות שימוש

0.1~1U של אנזימים UNG לכל תגובה של 50ul.

משלוחשיפה והאחסנה

האחסנה ב-20°C, שיפורה עם גלידת גל.