آنزیم گرما پایدار Uracil-DNA Glycosylase (UNG) - بسیار اختصاصی برای حذف dU در تهیه نمونه PCR و NGS، افزایش کنترل کیفیت DNA

توضیح

Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، نسخه حرارتی-حساس یک پروتئین بازتولیدی در E. coli است که از باکتری دریایی منشاء می‌باشد. این آنزیم به طور هیدرولیزیکوند اتصال گلیکوزیدیک بین اوراسیل و DNA را در DNA تک‌رشته‌ای و دوپاره‌ای شکست می‌دهد، اوراسیل را خارج می‌کند و نقاط حساس به قلیایی بدون پایه در DNA ایجاد می‌کند. این آنزیم روی RNA و DNA اصلی بدون اوراسیل فعالیت نمی‌کند. از آنجا که Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، نسخه حرارتی-حساس نیازی به یون‌های فلزی ندارد، در حضور EDTA کاملاً فعال است.

آنزیم Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Thermolabile می‌تواند با dUTP برای حذف آلودگی‌های 'حمل و نقل PCR' از واکنش‌های قبلی تولید DNA استفاده شود. برای آن که محصولات PCR قابل تخریب شدن باشند، باید dTTP در میکس واکنش PCR با dUTP جایگزین شود. واکنش‌های PCR بعدی باید پیش از PCR با Anzyme Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Thermolabile پیش‌درمانی شوند تا DNA شامل اوراسیل تخریب شود. DNA اصلی شامل اوراسیل نیست بنابراین نمونه توسط این روش تخریب نمی‌شود.

منبع: E. coli بازسازی شده

Carthy و اندازه: 1U/μL

کاربردها:

qPCR و Digital PCR: حذف اوراسیل از محصولات PCR قبلی برای جلوگیری از دوباره افزایش در واکنش‌های بعدی، حساسیت و ویژگی آزمایش را افزایش می‌دهد.

sequencing نسل بعدی (NGS): مؤلفه کلیدی در فرآیندهای آماده‌سازی نمونه NGS برای حذف پایه‌های اوراسیل از DNA آلوده، دقت توالی را بهبود می‌بخشد و نوفه پس زمینه را کاهش می‌دهد.

تحلیل پزشکی قانونی: به کشف دقیق‌تر و قابل اتکا تر مقدار ناچیز DNA در نمونه‌های پزشکی قانونی کمک می‌کند با کاهش حداکثر آلودگی متقاطع.

تشخیص متیلاسیون: همزمان با روش‌های تبدیل بیسلفیت، درمان UNG حذف سیتوزین‌های غیرمتیل شده که به اوراسیل تبدیل شده‌اند را تضمین می‌کند و این موضوع تحلیل متیلاسیون را تسهیل می‌کند.

حذف مهارکننده: کمک می‌کند تا DNA را تصفیه کند با گسترش DNA زخمی یا آسیب دیده شامل اوراسیل، بنابراین خلوص دنباله‌های DNA هدف را افزایش می‌دهد.

انزیم گلیکوزیلاز DNA-اوراسیل حرارتی قابل حل، ابزاری ضروری برای بیولوژیست‌های مولکولی و محققانی است که در آزمایشات حساس مبتنی بر اسید نوکلئیک فعالیت می‌کنند، که کنترل بیشتری بر سلامت نمونه DNA ارائه می‌دهد و اثرات ناخواسته را کاهش می‌دهد که می‌تواند نتایج آزمایش را تحت تأثیر قرار دهد.

تعریف واحد

یک واحد به عنوان مقدار Uracil-DNA Glycosylase (UNG) تعریف می‌شود که لازم است برای کاملاً تخریب 1 میکروگرم DNA تک رشته‌ای حاوی اوراسیل در دماي 37 درجه سانتیگراد در مدت زمان 60 دقیقه.

مایع ذخیره‌سازی

20mM Tris-HCl (pH8.0)، 0.1mM EDTA، 100mM KCl، 1mM DTT، 0.5%(v/v) Tween-20، 0.5%(v/v) NP-40، 50%(v/v) گلیسرول.

کنترل کیفیت

صافی >99% توسط SDS-PAGE

هیچ آلودگی از اندونوکلاز، نیکاز، اکسونوکلاز و RNase وجود ندارد.

غیرفعال‌سازی با گرما

50°C برای 2 دقیقه

دماي واکنش

20~37°C برای 10 دقیقه.

مقدار مصرف

0.1~1U آنزیم UNG برای هر واکنش 50 میکرولیتری.

ارسال و ذخیره سازی

ذخیره سازی در دمای -20°C، ارسال با یخ ژل.