محلول بازدارنده ریبونوکلئاز بسیار خالص - بازدارنده RNase 40U/μl، بهینه برای محافظت از RNA در سنتز cDNA و کاربردهای زیست شناسی مولکولی

توضیحات محصول

معرفی محلول مهارکننده ریبونوکلئاز با خلوص بالا، یک معرف با کیفیت بالا که دارای مهار کننده rnase در غلظت فوق متمرکز 40 واحد/μl است. این محلول به طور خاص برای ارائه حداکثر حفاظت در برابر ریبونوکلئازها در حین کار با RNA در روش‌های مختلف زیست‌شناسی مولکولی طراحی شده است.

ویژگی‌های کلیدی

• خالصی فوق العاده: مهارکننده ریبونوکلئاز به صورت بازتولیدی تولید شده و با استانداردهای شدید خالص سازی شده است تا درجه خالصی بالایی را تضمین کند و اطمینان حاصل کند که آزمایش‌های شما تحت تأثیر قرار نگیرد.

• فرمولUltra-Concentrated: با غلظت 40U/μl، این مهارکننده اجازه می‌دهد در کاربردهای پیچیده که حتی مقدار کمی از RNase می‌تواند نتایج را متاثر کند، به طور کارآمد استفاده شود.

• فعالیت گسترده: این مهارکننده به طور موثر مجموعه‌ای گسترده از RNases A، B، C و دیگر اندو- و اکسو-ریبونوکلئازها را محاصره می‌کند و از تخریب نمونه‌های RNA شما جلوگیری می‌کند.

• ثبات و فعالیت: طراحی شده برای ثبات در دامنه‌ای از دماها و شرایط pH، مهارکننده در طول ذخیره‌سازی و در طی مختلف پروتکل‌های آزمایشگاهی فعال می‌ماند.

• سازگاری: مناسب برای استفاده با سیستم‌های خودکار و واکنش‌های آماده‌شده دستی، کاملاً سازگار با بافرها و انزیم‌های معمولاً مورد استفاده در합ش cDNA و تکنیک‌های نگاشتن اسید نوکلئیک است.

کاربردها

• تهیه cDNA: ضروری برای جلوگیری از آلودگی RNase در واکنش‌های ترنسکریپتیون معکوس، که بهبود عملکرد و سلامت cDNA تولیدشده را افزایش می‌دهد.

• جداکردن و تصفیه RNA: مؤلفه اصلی در مجموعه‌های استخراج RNA و جریان کار تصفیه برای حفظ سلامت RNA قبل و بعد از جداکردن است.

• بلات شمالی: اطمینان از انتقال و هیبریداسیون RNA با کیفیت بالا را تأمین می‌کند توسط مهار فعالیت RNase که می‌تواند RNA روی ممبران‌ها را زیر سوال ببرد.

• qPCR و RT-qPCR: حفاظت از الگوهای RNA در آزمایش‌های PCR کمی و ترنسکریپتیون کمی PCR را افزایش می‌دهد، حساسیت و ویژگی را بهبود می‌بخشد.

• مطالعات تعامل RNA-پروتئین: مولکول‌های RNA را در طی کو-ایمونوپریسیپیتیشن (RIP) و سایر آزمایش‌های تعامل RNA-پروتئین حفظ می‌کند.

منبع

نوع E. coli که یک کلون بازتولیدی شامل ژن مهارکننده ریبونوکلاز از پلاسنتای انسانی را بیان می‌کند.

غلظت

40 U/μl.

تعریف واحد

یک واحد به عنوان مقدار مهارکننده ریبونوکلاز بازتولیدی تعریف می‌شود که فعالیت 5 نانوگرم از ریبونوکلاز A را به میزان 50٪ مهار می‌کند.

فعالیت با مهار هیدرولیز سیتیدین 2'3'-سیکلیک مونوفسفات توسط ریبونوکلاز A اندازه‌گیری می‌شود.

مایع ذخیره‌سازی

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v/v) گلایسرول

حافظه

در دماهای -20°C نگهداری شود

کنترل کیفیت

عدم وجود اندونوکلاز

یک میکروگرم DNA لامبدا با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.

پس از کشت، DNA لامبدا به صورت کامل روی ژل آگاروز استaining شده با برومید اتیدیوم قابل مشاهده است تا عدم وجود اندونوکلاز قابل مشاهده را تأیید کند.

عدم وجود نیکاز

یک میکروگرم pBR322 خمیری نوع I با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.

پس از کشت، DNA خمیری روی ژل آگاروز استaining شده با برومید اتیدیوم قابل مشاهده است تا عدم وجود نیکینگ یا برش قابل مشاهده را تأیید کند.

عدم وجود اکسونوکلاز

یک میکروگرم نشانگر Lambda DNA/HindIII با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 16 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.

پس از کشت، نشانگر Lambda DNA/HindIII توسط ژل آگاروز 1% جداسازی شده و با برومید اتیدیوم رنگ آمیزی می‌شود. نشانگرهای بدون پراکنش به صورت باند کامل باقی می‌مانند.

عدم وجود RNase و RNase پنهان

برای آزمایش وجود فعالیت RNase، یک میکروگرم RNA با 200 واحد مهارکننده ریبونوکلاز برای 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد کشت می‌شود.

پس از حضن، RNA به صورت باند کامل روی ژل آگاروز با رنگ‌آمیزی برادیوم اتیدیوم مشاهده می‌شود تا غیاب RNase قابل دیده را تأیید کند.

برای آزمایش وجود فعالیت پنهان RNase، 200 واحد مهارکننده Ribonuclease در دماهای 70 درجه سانتیگراد برای 15 دقیقه حرارتی خراب شده و با 1 میکروگرم RNA برای 4 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد حضن می‌شود.

پس از حضن، RNA به صورت باند کامل روی ژل آگاروز با رنگ‌آمیزی برادیوم اتیدیوم مشاهده می‌شود تا غیاب RNase قابل دیده را تأیید کند.

پاکیبود فیزیکی

پاکیبود حداقل 95٪ است که توسط ژل پلی‌اکریلامید SDS با رنگ‌آمیزی Coomassie blue تعیین شده است.

یادداشت استفاده

مهارکننده Ribonuclease در دامنه pH گسترده‌ای (pH5.5-9) فعال است. استفاده استاندارد RT و تراگیری in vitro از مهارکننده Ribonuclease با غلظت نهایی 1 واحد در میکرولیتر است.