Termolabil Uracil-DNA Glikozilaz (UNG) ferment - PCR və NGS nümunə hazırlığında dU-nun aradan qaldırılması üçün yüksək spesifikdir, DNA keyfiyyətinin nəzarətini artırır

Təsvir

Uracil-DNA Glikozilaz (UNG), Termolabil E. coli-də rekombinant protein olup, dəniz bakteriyasından gəlir. Enzim, urasil-glikozidik birləşmələri U-DNA-da tək və ikiqat DNA-da silər və urasilini çıxarır, DNA-da asidiyyətə həssas abazik yerlər yaradır. Enzim RNA və urasil-dən azad orijinal DNA-da fəaliyyətsizdir. Uracil-DNA Glikozilaz (UNG), Termolabil heç bir metal ionuna ehtiyaç duymadığından, EDTA varlıqında tamamilə fəaliyyət göstərir.

Uracil-DNA Glikozilaz (UNG), Termolabil dUTP ilə istifadə oluna bilər ki, əvvəlki DNA sintezi reaksiyalarından PCR „keçid“ sirlənmələrini silmək üçün istifadə edilsin. PCR məhsullarının deaktivasiya olunmasına müsbət təsir etməsi üçün PCR reaksiya mixində dTTP-ni dUTP ilə əvəz etmək lazımdır. Növbəti PCR reaksiya mixləri PCR-dən əvvəl Termolabil Uracil-DNA Glikozilaz (UNG) ilə əvvəlliklə işlənib urasil içərisində olan DNA-nı deaktivasiya etmək üçün istifadə olunmalıdır. Asli DNA-da urasil yoxdur, bu səbəbdən nümunə bu proseduradan təsir almadan qalır.

Mənbə: Rekombinant E. coli

Konsentrasiya və ölçü: 1U/μL

Tətbiqlər:

qPCR və Digital PCR:Əvvəllərki PCR məhsullarında urasilin silinməsi ilə nüvbəti reaksiyalarda yenidən amplitifikasiyanı dayandırmaq, assayın həssaslığını və spesifikiyyetini artırmaq.

Növbəti Dövlət Sıralama (NGS): Müxbir DNA molekulalarından urasil bazlarını silmək üçün NGS-nin sample hazırlığı işçilərində əsas hissə, sıralamanın dəqiqliyini yaxşılaşdırır və arxa fon gürültüsünü azaldır.

Forensik analiz: Forensik sample-larda iz məbləğində DNA-nı daha dəqiqlikli və güvəndirləşdirilmiş şəkildə aşkar etməyə imkan verir, cross-contamination-u minimuma endirməklə.

Methylation aşkar etmə: Bisulfit çevrilməsi üsulları ilə birləşdirdikdə, UNG treatment-i metil olmayan sitozinləri urasillə çevriləninin silinməsinə və methylation analizi ilə bağlı olan proseslərin asanlaşmasına mane edir.

Inhibitor silinməsi: Uracil içərisində bozulmuş və ya zədələnmiş DNA-nı dissolye etməklə target DNA sıralarının təhlili üçün DNA-nı təhriqləndirməyə kömək edir.

Termolabil Uracil-DNA Glikozilaz Enzimi, molekulyar biologlar üçün və nükleik asitlərə əsaslanan həssas eksperimentlərdə işgələnən tədqiqatçılar üçün necəsiz bir alət olub, DNA nümunələrinin tamliyini üstünlüklü şəkildə idarə edir və eksperimental nəticələri pozitiv şəkildə təsirləyə biləcək istenməz artefaktları azalda bilməyə kömək edir.

Vahid Təyinatı

Bir vahid, 37°C temperaturada 60 dəqiqə ərzində pürifikasiya edilmiş urasil-içərən tək zəncərəli DNA-nın tamamilə pozisya altına gətirmək üçün tələb olunan Uracil-DNA Glikozilaz (UNG)-nın miqdarıdır.

Saxlama Bufferi

20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(h/h) Tween-20, 0.5%(h/h) NP-40, 50%(h/h) glicerol.

Keyfiyyət nəzarəti

SDS page ilə təmizliyi>99%

Endonükleaz, Nickaz, Ekzonükleaz və RNazə bəhsləndirici maddələrə ehtiva etmir.

İstiqləşdirici istiqləşmə

50°C üçün 2 dəqiqə

Reaksiya temperaturu

20~37°C üçün 10 dəqiqə.

İstifadə miqdarı

50ul reaksiyada 0.1~1U UNG enzimləri.

Çatdırılma və saxlama

-20°C-də saxla, gel buz ilə çatırılın.