إنزيم URACIL-DNA Glycosylase (UNG) الحراري - محدد للغاية لإزالة dU في PCR و NGS إعداد العينات ، مما يحسن من التحكم في جودة الحمض النووي

وصف

إنزيم Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، الحساس للحرارة هو بروتين مستنسخ في E. coli، ينبع من البكتيريا البحرية. يقوم الإنزيم بهydrolyzing الروابط الغليكوسيدية للأوراسيل في DNA المفرد والمزدوج السلاسل، مما يؤدي إلى استئصال الأوراسيل وإنشاء مواقع حساسة قلوياً في DNA. لا يكون الإنزيم نشطاً على RNA وDNA الأصلي الخالي من الأوراسيل. بما أن Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، الحساس للحرارة لا يحتاج إلى أيونات معدنية، فإنه يكون نشطاً تماماً حتى في وجود EDTA.

يمكن استخدام إنزيم Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، الحراري الحساس مع dUTP للتخلص من التلوثات الناتجة عن الاستجابات السابقة لتفاعل PCR. لتحقيق ذلك، يجب استبدال dTTP بـ dUTP في خليط تفاعل PCR. يجب معالجة خليطPCR اللاحق مسبقًا بإنزيم Uracil-DNA Glycosylase (UNG)، الحراري الحساس قبل بدء PCR لتدمير الحمض النووي الذي يحتوي على اليوراسيل. لا يحتوي الحمض النووي الطبيعي على اليوراسيل، وبالتالي فإن العينة لا تتعرض للتدمير بهذه الطريقة.

المصدر: E. coli المُعاد تركيبه

التركيز والحجم: 1 وحدة/μL

التطبيقات:

qPCR وDigital PCR: إزالة اليوراسيل من منتجات PCR السابقة لمنع إعادة التضخيم في الاستجابات اللاحقة، مما يزيد من حساسية الاختبار ومدى دقيقه.

التسلسل الجيني التالي (NGS): مكون أساسي في عمليات إعداد عينات NGS لإزالة قواعد اليوراسيل من جزيئات الحمض النووي الملوثة، مما يحسن دقة التسلسل ويقلل الضوضاء الخلفية.

تحليل الأدلة الجنائية: يمكّن من الكشف الدقيق والموثوق أكثر عن كميات ضئيلة من الحمض النووي في العينات الجنائية عن طريق تقليل التلوث المتبادل.

اكتشاف الاحتواء: بالاشتراك مع طرق تحويل البيسلفيت، يضمن علاج UNG إزالة السيتوزين غير الميثيل الذي تم تحويله إلى اليوراسيل، مما يسهل تحليل الاحتواء.

إزالة المثبطات: يساعد في تنقية الحمض النووي عن طريق هضم الحمض النووي المتدهور أو التالف الذي يحتوي على اليوراسيل، مما يعزز من نقاء سلاسل الحمض النووي المستهدفة.

إن إنزيم Uracil-DNA Glycosylase الحراري هو أداة لا غنى عنها للمحليين الجزيئيين والباحثين الذين يعملون في التجارب الحساسة القائمة على الحمض النووي، حيث يقدم سيطرة أفضل على سلامة عينة الحمض النووي وتقليل المشاكل غير المرغوب فيها التي قد تؤثر على نتائج التجربة.

تعريف الوحدة

تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية إنزيم Uracil-DNA Glycosylase (UNG) اللازمة لتدمير 1μg من الحمض النووي الأحادي السلاسل الذي يحتوي على اليوراسيل تمامًا عند درجة حرارة 37°C خلال 60 دقيقة.

محلول التخزين

20mM Tris-HCl (pH8.0)، 0.1mM EDTA، 100mM KCl، 1mM DTT، 0.5%(v/v) Tween-20، 0.5%(v/v) NP-40، 50%(v/v) الجлицيرول.

التحكم في الجودة

النقاء >99% بواسطة SDS PAGE

لا يوجد تلوث من إندونوكلياز، نيكاز، إكسونوكلياز أو إنزيم RNase.

إبطال النشاط الحراري

50°C لمدة 2 دقيقة

درجة حرارة التفاعل

20~37°C لـ 10 دقائق.

كمية الاستخدام

0.1~1U من إنزيمات UNG لكل تفاعل 50 ميكروليتر.

الشحن والتخزين

يُخزن عند -20°C، ويُشحن مع جل ثلجي.