محلول مثبط ريبونوكلياز نقي للغاية - مثبط ريناز 40U / μl ، مثالي لحماية الرنا في تركيب cDNA وتطبيقات البيولوجيا الجزيئية

وصف المنتج

تقديم محلول مثبط ريبونوكلياز عالي النقاء لدينا، وهو كاشف عالي الجودة يحتوي على مثبط رناز بتركيز فائق يبلغ 40 وحدة/ميكرولتر. تم تصميم هذا المحلول خصيصًا لتوفير أقصى حماية ضد ريبونوكليازات أثناء التعامل مع RNA في إجراءات البيولوجيا الجزيئية المختلفة.

الميزات الرئيسية

• نقاء استثنائي: يتم إنتاج مثبط الريبونوكلياز بشكل مستنسخ ويُنقَّى بشدة لضمان درجة عالية من النقاء، مما يضمن عدم التداخل مع تجاربك.

• صيغة فائقة التركيز: يتم توفير المثبط بتركيز 40U/μl، مما يسمح باستخدام كفء في التطبيقات الصعبة حيث يمكن أن تتسبب حتى الكميات الدقيقة من RNase في تأثير نتائجك.

• فعالية واسعة الطيف: يعمل المثبط على تحييد مجموعة واسعة من الريبونوكليازات A، B، C وغيرها من الإنزيمات الداخلية والخارجية للريبونوكلياز، مما يحمي عينات RNA الخاصة بك من التدهور.

• مستقرة ونشيطة: تم صياغتها لتحقيق الاستقرار عبر نطاق من درجات الحرارة وظروف pH، يبقى المثبط نشطًا أثناء التخزين وعلى مدار بروتوكولات التجارب المختلفة.

• التوافق: مثالي للاستخدام مع الأنظمة الآلية والتفاعلات المعدة يدويًا، فهو متوافق تمامًا مع العوامل المخففة والأنزيمات الشائعة الاستخدام في تكوين cDNA وتقنيات تعديل الحمض النووي.

التطبيقات

• تكوين cDNA: ضروري لمنع تلوث RNase أثناء تفاعلات الترجمة العكسية، مما يحسن إنتاجية وسلامة cDNA المُصنع.

• عزل وتنقية RNA: عنصر أساسي في مجموعات استخلاص RNA وعمليات التنقية للحفاظ على سلامة RNA قبل وبعد العزل.

• النقل الشمالي (Northern Blotting): يضمن نقل وгибاس RNA عالي الجودة من خلال منع نشاط RNase الذي قد يؤدي إلى تحلل RNA على الأغشية.

• qPCR و RT-qPCR: يحمي قوالب RNA في فحوصات PCR الكمية والترجمة العكسية PCR الكمية، مما يعزز الحساسية والدقة.

• دراسات تفاعل الحمض النووي الريبي مع البروتين: تحافظ على جزيئات الحمض النووي الريبي أثناء التحصين المشترك (RIP) والتجارب الأخرى المتعلقة بالتفاعل بين الحمض النووي الريبي والبروتين.

مصدر

سلالة E. coli التي تعبر عن نسخة مُعاد تشكيلها تحمل جين مثبط الريبونوكلياز من المشيمة البشرية.

التركيز

40 وحدة/μl.

تعريف الوحدة

تُعرَّف الوحدة الواحدة على أنها الكمية من مثبط الريبونوكلياز المُعاد تشكيلها المطلوبة لمنع نشاط 5 نانوجرام من الريبونوكلياز A بنسبة 50%.

يُقاس النشاط من خلال منع تحلل السيتيدين 2'3'-سيكليك مونوفوسفات بواسطة الريبونوكلياز A.

محلول التخزين

20mM HEPES-KOH (PH7.6)، 50mM KCl، 8mM DTT، 50% (v/v) الجليسيرول

تخزين

احفظ عند -20°C

التحكم في الجودة

غياب إنزيم إندونوكلياز

تُحضَّن 1 ميكروغرام من الحمض النووي للامدا مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.

بعد التحضين، يتم تصوير الحمض النووي لامدا ككامل على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب إندونوكلياز مرئي.

غياب نيكساز

تُحضَّن 1 ميكروغرام من pBR322 الدائري من النوع الأول مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 4 ساعات عند 37 درجة مئوية.

بعد التحضين، يتم تصوير الحمض النووي الدائري على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب القطع أو الشقوق المرئية.

غياب إكسبونوكلياز

تُحضَّن 1 ميكروغرام من علامات Lambda DNA/HindIII مع 200 وحدة من مثبط ريبونوكلياز لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية.

بعد التحضين، يتم فصل Lambda DNA/HindIII Markers بواسطة جل الأغاريوز بنسبة 1% وتصبغ ببروميد الإيثيديوم. تظل العلامات كأشرطة كاملة دون تشويش.

غياب RNase والـ RNase الكامنة

لاختبار وجود نشاط RNase، يتم حضن 1 ميكروغرام من RNA مع 200 وحدة من مثبط Ribonuclease لمدة 4 ساعات عند 37°C.

بعد الحضن، يتم تصوير RNA كحزمة سليمة على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب RNase المرئية.

لاختبار وجود نشاط RNase الكامن، يتم تحلل 200 وحدة من مثبط Ribonuclease بالحرارة عند 70°C لمدة 15 دقيقة ثم حضنها مع 1 ميكروغرام من RNA لمدة 4 ساعات عند 37°C.

بعد الحضن، يتم تصوير RNA كحزمة سليمة على جل الأغاريوز الملون ببروميد الإيثيديوم للتحقق من غياب RNase المرئية.

النقاء الفيزيائي

النقاء ≥95% كما يُحكم عليه بواسطة جل البولي أكريلاميد SDS مع صبغ Coomassie blue.

ملاحظة الاستخدام

مثبط Ribonuclease نشط في نطاق pH الواسع (pH5.5-9). يستخدم RT القياسي والنسخ الاصطناعي في vitro مثبط Ribonuclease بتركيز نهائي قدره 1u/ul.