Termo-molebale Uracil-DNA Glikosilase (UNG) Ensiem - Hoogs spesifiek vir dU Verwydering in PCR en NGS Probe Voorbereiding, Verbetering van DNA Kwaliteitskontrole
- Inleiding
Inleiding
Beskrywing
Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Termolabele is 'n rekombinante eiwit in E. coli, afkomstig van 'n seebacterie. Die enzym hiddere uracil-glykosidiese bande by U-DNA in enkel- en dubbelstrengige DNA, wat uracil uitreën en alkali-sensitiewe basislose stelle in die DNA skep. Die enzym is onaktief op RNA en oorspronklike, uracil-vrye DNA. Aangesien Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Termolabele geen metaal-ionvereistes het, is dit volledig aktief in teenwoordigheid van EDTA.
Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Thermolabile kan gebruik word met dUTP om PCR “carry over” verontreinigings van vorige DNA-sintesereaksies te elimineer. Om PCR-produkte vatbaar te maak vir degradasie, moet dTTP deur dUTP vervang word in die PCR-reaksimengsel. Volgende PCR-reaksimengsels moet vooraf behandel word met Uracil-DNA Glycosylase (UNG), Thermolabile voordat PCR plaasvind om uracil-bevatte DNA te degrader. Oorspronklike DNA bevat nie uracil nie, sodat die steekproef nie deur hierdie proses gedegradeer word nie.
Bron: Rekombinant E. coli
Konsentrasie en Grootte: 1U/μL
Toepassings:
qPCR en Digitale PCR: Eliminasie van uracil uit vorige PCR-produkte om her-vervuldiging in volgende reaksies te voorkom, wat die sensitiviteit en spesifisiteit van die toets verhoog.
Volgende-Sekwensering (NGS): Kritieke komponent in NGS-steekproefvoorbereidingswerkstrome om uracil-atome uit verontreinigende DNA-molekuul te verwyder, wat sekwensieakkuraatheid verbeter en agtergrondgeruis verminder.
Forensiese Analise: Stel meer akkurate en betroubare opsporing van spore van DNA in forensiese monsters moontlik deur kruisverontreiniging te minimaliseer.
Metilering Ontdekking: Saam met bisulfaat-konversiemetodes verseker UNG-behandeling die verwydering van onmetileerde sitosien wat omgevorm is na urasil, wat methyleer-analise vergemaklik.
Inhibitor Verwydering: Help om DNA te purifiseer deur gedegradeerde of geskadigde DNA wat urasil bevat te verteer, wat die reinheid van doelwit-DNA-reeksverbetering.
Die Thermolabile Uracil-DNA Glycosylase Enzym is 'n onmisbare instrument vir molekulêre bioloë en navorsers wat ingespanne in sensitiwiteit gebaseerde nukleinsuur eksperimente ingeskryf is, aanbiedend superieure beheer oor DNA-steekproef integriteit en verminder ongewenste artefakte wat eksperimentele uitslae kan kompromitteer.
Eenhede Definisie
Een eenheid word gedefinieer as die hoeveelheid Uracil-DNA Glycosylase (UNG) wat nodig is om volkome 1μg van gezuiverde enkelvoudige streng uracil-bevatte DNA by 37°C in 60min te degrader.
Opslagbuffer
20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(v/v) Tween-20, 0.5%(v/v) NP-40, 50%(v/v) glyserol.
Kwaliteitsbeheer
Reinheid >99% deur SDS page
Geen verontreiniging van Endonuclease, Nickase, Exonuclease en RNase.
Warmte-inaktivering
50°C vir 2 min
Reaksietemperatuur
20~37°C vir 10 min.
Hoeveelheid van gebruik
0.1~1U van UNG-ensieme per 50ul reaksie.
Vervoer en berging
Bewaar by -20°C, vervoer met gelysye.