poli-a polimerase em preparações de sequenciamento de próxima geração (ngs)

poli-a polimerase(PAP) é uma ação enzimática chave que é responsável por adicionar a cauda poli-A à extremidade 3’ das moléculas de RNA. Esta atividade tem um papel significativo na estabilidade geral, transporte e tradução do RNA. Dentro do contexto de NGS, no entanto, o PAP permite a adição do oligo A às amostras de RNA antes da sequenciação, de modo que dados de alta qualidade de várias fontes de RNA possam ser adquiridos.

A Importância da Adição da Cauda Poli A

Existem muitas vantagens associadas à incorporação da cauda poli A ao mRNA. Em primeiro lugar, a cauda A ajuda a aumentar a estabilidade das moléculas de RNA contra a atividade de ribonucleases por exonucleases. Em segundo lugar, a cauda poli A tem um papel a desempenhar na iniciação da tradução através da promoção da ligação do ribossomo ao mRNA. No caso das preparações de NGS, o mRNA com cauda poli A pode ser facilmente utilizado para uma análise mais focada da expressão gênica, juntamente com variações de transcritos, pois podem ser especificamente enriquecidos.

Preparação de Amostras NGS

Os fluxos de trabalho de NGS incluem a preparação das amostras de RNA que envolvem os seguintes passos: transcrição reversa, construção de cDNA e amplificação. Também é comum adicionar polimerase Poly A durante a síntese de cDNA para incluir uma cauda poli-A nas moléculas de cDNA finais. Essa modificação é crítica para a amplificação e sequenciamento da biblioteca, uma vez que aumenta a eficiência das etapas envolvidas na preparação das bibliotecas.

Aplicações em RNA-Seq

A PAP também é muito útil em aplicações de sequenciamento de RNA (RNA-Seq) porque permite um enriquecimento mais eficiente para mRNA com cauda poli A. Isso ajuda a capturar uma imagem mais clara do transcriptoma do organismo em estudo. Assim, tal aprimoramento pode ajudar a determinar genes diferencialmente expressos, eventos de splicing alternativo ou até mesmo RNAs não codificantes. Além disso, incluir PAP nas preparações de NGS permite que dados mais promissores sejam obtidos.

Adicionar PAP nas preparações de NGS pode melhorar significativamente a qualidade e a precisão dos dados de sequenciamento. O que é mais importante, à medida que a pesquisa continua a progredir, a importância do PAP para permitir que os cientistas investiguem o transcriptoma permanecerá major.