M-MLV reverse transcriptase သည် molecular biology တွင်ရှိ role နှင့် applications

အင်ဇိမ်းများသည် မော်လက်ယူလ်ဘွဲ့ရောဂါပညာနှင့်ဆက်စပ်၍ တစ်ခါတစ်ရံတွင် မိုက်လိုက်ယူလ်ဘွဲ့ရောဂါပညာအခြေခံအထဲတွင် အဓိကအခန်းကဏ္ဍများဖြစ်လာခဲ့သည်။ m-mlv ဆန့်ကျင်ဘက် transcriptase (M-MLV RT) အင်ဇိမ်းများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်ပြီး ဒါဟာ RNA တမ်ပလိတ်မှ cDNA ကို ထုတ်လုပ်နိုင်သည့်အကြောင်း များစွာသော အရာဝတ္တုများကို လက်ခံခဲ့ပြီး၊ Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) မှရရှိသော အင်ဇိမ်းကို အခြားသော လေ့လာရေးလိုင်းများမှ အသုံးပြုသည့် ဂျင်ကလိုနီ၊ အabeeးရှင်းလွင်ခြင်းနှင့် ဖန်တီးရေးဂျင်နွေးမှုလေ့လာရေးအတွက် အသုံးပြုသည်။

M-MLV Reverse Transcriptase ၏ ဖွဲ့စည်းပုံနှင့် လုပ်ဆောင်ချက်

M-MLV Reverse Transcriptase သည် DNA-dependent DNA polymerase အဖြစ်လုပ်ဆောင်ပြီး RNA-dependent DNA polymerase နှင့် ribonuclease H (RNase H) activities တို့ဖြင့်လည်း လုပ်ဆောင်သည်။ ဒါဟာ RNA တမ်ပလိတ်များကို အလားတူတွေ့ရှိပြီး dNTPs အဖြစ် substrates အဖြစ်သုံးပြီး cDNA strands ကို ထုတ်လုပ်သည်။ M-MLV RT ၏ RNase H activity သည် cDNA synthesis ပြီးနောက် RNA တမ်ပလိတ်ကို ဖျက်သိမ်းပြီး single-stranded cDNA ထုတ်လုပ်ခြင်းကို ပြောင်းလဲသည်။

M-MLV Reverse Transcriptase ၏ အသုံးပြုချက်များ

cDNA ပြုစုခြင်း: M-MLV RT ကိုသုံး၍ inverse transcription နည်းလမ်းများက RNA အရေအတွက်ကို cDNA များအဖြစ်ပြောင်းလဲရန်သုံးသည့်အမှန်တရားဆိုင်ရာလုပ်ဆောင်ချက်များဖြစ်သည်။ Quantitative PCR၊ ဂီးန်ဖိုင်ရှိ expression analysis သို့မဟုတ် cDNA library တည်ဆောက်ရန် downstream လုပ်ဆောင်ချက်များအတွက် ဒီဇာတ်ကိုယူထားရန်အတွက်အရေးကြီးဖြစ်သည်။

ဂီးန်ကလုံးခြင်း: M-MLV RT ကိုသုံး၍ သုံးသပ်သူများသည် RNA မဲ့မဲ့မှတ်တမ်းများမှအထူးဂီးန်များကလုံးနိုင်သည်။ ထို့အပြင် အထူးပြုထားသောဂီးန်များကိုပြီးခဲ့သည်နှင့် သူတို့ကို function အကြောင်းသိရှိရန်အတွက်ထိုများကိုပြောင်းလဲနိုင်သည်။

Expression Analysis: qPCR သို့မဟုတ် microarray analysis အတွင်းတွင် enzyme ၏ RNase H activity ဖြင့်ဖြစ်သည့်အခါတွင် cDNA များကိုဖန်တီးရန်အတွက်အဓိကအဆင့်တစ်ခုဖြစ်သည်။ ထိုနည်းလမ်းများဖြင့် သိပ္ပံမဲ့မဲ့မှတ်တမ်းများတွင် genes ကဘယ်လိုသို့မဟုတ်မည်သို့ဖြင့်ကျွန်းစွာဖြင့်ဖြစ်ပေါ်လာသည်ကိုသိရှိရန်လိုအပ်သည်။ ထို့ကြောင့် ဂီးန်များ၏ regulation နှင့် function ကိုအဓိပ္ပါယ်ပြန်ရန်အကူအညီပေးသည်။

ဖန်ရှင်ခြင်းဂျင်းမီကာလေ့လာခြင်း: ဖန်ရှင်ခြင်းဂျင်းမီကာလေ့လာခြင်းတွင် M-MLV RT သည် ရှုံးထွက်သော RNA အစုံမှ cDNA libraries ကို ပြုလုပ်ရာတွင် အသုံးပြုသည်။ ထို libraries များကို ဆိုးရိုးများသို့မဟုတ် ဖြေရှင်းချက်များဖြင့် ဆောင်ရွက်လိုသော ဂျင်းများကို ရှာဖွေပြီး ဂျင်း၏ လုပ်ဆောင်ချက်နှင့် ဆက်ဆံမှုအကြောင်း အသစ်များကို ရှင်းလင်းပေးသည်။

အမြစ်များနှင့် ယူဆချက်များ

M-MLV Reverse Transcriptase သည် မြင့်မားသော ကူးယူမှု၊ အထောက်အထားနှင့် ပြန်လုပ်ချက်များအတွက် အမြင်အသိုင်းများရှိသည်။ သို့သော်လည်း အခြားအခါများတွင် အင်္ဂါအတွင်း optimal temperature၊ pH တန်ဖိုးများနှင့် salt concentration အောက်တွင် လုပ်ဆောင်သည်။ cDNA synthesis အတွင်းတွင် M-MLV RT ၏ RNase H activity ကြောင့် RNA template ကို ချိုးဖျက်လိုက်ပါက ဖြစ်လာသော cDNA ၏ ပမာဏနှင့် အသိအမှတ်ကို လျော့နည်းစေနိုင်သည်။

အပြီးသတ်မှုအနေဖြင့်၊ M-MLV Reverse Transcriptase သည် RNA templates မှ cDNA ကို စီးပွားသောအခါ molecular biology research တွင်အသုံးဝင်သည့်အကျိုးအမြတ်ရှိသည့်အဆောက်အအုံတစ်ခုဖြစ်သည်။ Gene cloning၊ expression analysis နှင့် functional genomics studies တို့သည် M-MLV RT တွင် RNA-dependent DNA polymerase နှင့် RNase H activities တို့ကိုပါဝင်သောအတွက်လိုအပ်သည်။ ဒီဇယားမှာ enzyme activity တွေရဲ့လိုအပ်ချက်တွေနဲ့အတူတူတွဲဖက်ချက်တွေကိုလည်းသိထားရင်တော့ သုတေသနပညာရှင်တွေက M-MLV RT ရဲ့အားကိုသုံးပြီး gene function နဲ့ regulation ကို molecular အဆင့်မှလေ့လာနိုင်ပါသည်။