Il-ruolo u l-applicazzjonijiet ta' M-MLV reverse transcriptase fil-biologija molekulari

L-enzimi kien ifisseru sentrali għall-kemjija bioxjemika fi relazzjoni mal-kamp dinamiku tal-bioloġija molekulari. m-mlv transkriptażi inversa (M-MLV RT), li huwa widu minn dawn l-enzimi, aqbel li jipperċepi sħarsa kbira reċente għax jista' jagħmlu sintesi ta' cDNA minn templji ta' RNA. Dan l-enzim li jinkemm minn il-virus Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV), jiżba użu estensivMENTI fl-kloning tal-geni, l-analisi tal-espressjoni u l-studji ta' genomika funzjonali blie applikazzjonijiet oħra li jkunu magħrufa mill-laboratorji tat-taħbul.

Is-Struttura u L-Funzzjoni ta' M-MLV Reverse Transcriptase

Il-M-MLV Reverse Transcriptase tifunkzjonarja bħala DNA-dependent DNA polymerase billi jikkontenja aktarittajjiet ta' RNA-dependent DNA polymerase u ribonuclease H (RNase H). Huwa jirreċonosċi templji ta' RNA u jagħmlu sintesi ta' strandijiet ta' cDNA billi jistessu dNTPs wieħed bil-midja. L-attivtà ta' RNase H tal-M-MLV RT tiġġewwarja l-degradazzjoni tal-templa ta' RNA wara sintesi ta' cDNA, li tirriżultati fil-produzzjoni ta' cDNA singlu-strand.

Applikazzjonijiet ta' M-MLV Reverse Transcriptase

Synthezi tal-cDNA: It-tiequijiet ta' tranzizzjoni inverza li jkunu mgħżula bl-M-MLV RT huma proċeduri komuni li jkunu utli għal trasformazzjoni tal-miżwjiet tal-RNA fil-cDNAs. Għall-oqsar darba, inklużivament l-PCR Kwantitattiva, l-analiżi tal-espressjoni tal-ġeni jew l-ebda ta' libreri tal-cDNA, dawn il-teknika hija immissabili.

Kloning tal-Ġen: Billi maħmula użu tal-M-MLV RT, ir-riċerkaħi jistgħu jiklomu ġene speċifiki minn isampli tagħhom tal-RNA. Bħala riżultat, ġene particolari jistgħu jkunu misolati u mimplifikati bħalliek jkunu aħjar fl-analiżi funzjonali.

Analiżi tal-Espressjoni: Step essenzjali f’ kull tecnika tal-analiżi tal-espressjoni, kif l-qPCR jew l-analiżi tal-mikroċip, jagħmlu użu tas-sintetizza tal-cDNA mit-tnejn RNase H. Billi dan il-avveniment, is-scientisti jkunu jiċċekkjaw oportunitajiet biex jappreċja kif it-ġene jexprissjaw differenċjalment fis-sampli bioloġiċi, qed jagħmlu interpretazzjoni dwar reġulazzjoni u funzjoni tal-ġene.

Genomika Funksjonella: Fil-MLV RT tiftixxi għall-preparazzjoni tal-liġi cDNA minn popolazzjonijiet RNA kompleksa. Dawn il-liġi jkollha wara li jkun issewna għal ġeni b’funzjoni aw phenotype speċifiki, meta jirrivelu nuovi intiżżejjoni dwar il-funzjonalità tal-ġenijiet u l-interazzjoni.

Avvanzati u Konsiderazzjonijiet

L-enzima M-FLV Reverse Transcriptase għandha veveral avantaxxji kif effiċjenza alta, speċifiċità u riproduċibiltà. Imma għandna nispja li l-enzima jogħblu bħala bejn kondizzjonijiet speċifiki kif temperatura optima, valuri ta' pH ukoll koncentrazzjoni ta' sale. X’ħallux jkollha degradazzjoni tal-modell RNA għal aċtività RNase H tal-M-MLV RT li t’affettja kantità u kwalità ta’ cDNA naħli.

Fil-konclusjoni, M-MLV Reverse Transcriptase hija ġdid tal-aqsar awseb fil-riċerka ta' bioloġija molekulari biex jagħmlu cDNA minn templji ta' RNA għall-applikazzjonijiet varjati. L-kloning tal-ġeni, l-analisi tal-espressjoni u l-istudji ta' genomika funzjonali jiddependu kif ukoll minn M-MLV RT għax jiżeddiq bażjaru kliema polymerasi RNA-dipendenza u RNase H; dawn huma propprietaj unikja f’għalliehi li tradduttorji oħrajn. Bħall-mixxija dija dwar il-reqwiements tal-aċtività tal-enzim u soċjetajiet magħqufa ma' dan, ir-riċercaturi jistgħu jisservu l-potenzjal tal-M-MLV RT biex jiftuxxi l-funkzjonalità u regolamentazzjoni tal-ġeni fuq il-livell molekulari.