Pfu DNA polymerase-ын молекуляр биологийн төвөгтэй ажил

I. Танилцуулга PFU ДНК полимераз

Pfu ДНХ нь орчин үеийн молекуляр биологийн талбайд их хэрэглэгддэг аргаарчилсан үйлдлийн нэг юм. Энэ нь ухамсар хамгаалагдсан бактер Пирококкус фуриосус-аас гаргасан бүтээгдэхүүн юм. Энзим нь өндөр зөвлөх чадварыг, дагуулалтыг агуулсан тул PCR зохицуулалтын туршлага болон секвенингийн хариултуудад маш их хэрэглэгддэг. Taq polymerase-ийн алдаатай байдлын хувьд Pfu ДНХ polymerase нь өндөр дотоод бодит байдлаар ДНХ-ийг багасгүй байдлаар копируулдаг.

II. Pfu ДНХ Polymerase-ийн үнэ цэнэ

Pfu ДНХ polymerase-ийн тусгайлалттай нэг үзүүлэх үйлдлийн нэг нь энэ болон амьдралтай байдаг. Энэ нь 95°C хүртэлх температурт ажиллах чадвартай бөгөөд энэ нь ихэнхээсээ long PCR, nested PCR гэх мэт их температурын стабильд хэрэглэгдэх ёстой зорилгоор зориулж болно. Мөн энэ enzyme-д 3’-аас 5’ руу явдаг exonuclease proofreading үйлдэл бий бөгөөд энэ нь дамжуулалтын фиделитиа-г нэмэгдүүлдэг. Иймд синтез хийх үед тохирохгүй нүүрсний орон суурийг олоод засах боломжтой бөгөөд эцсийн бүтээгдэхүүн нь эх сурвалжтай ижил байна.

III. Pfu ДНХ Polymerase-ын молекулар биологи дахь хэрэглээ

Молекуляр биологийн хэд хэдэн арга зүй Пфу ДНХ полимеразыг ашиглахад тусгаарлагдаж байна, учир нь энэ эрсдлийн хамгийн их үзэгдэл нь PCR-д тусалж буй энзимийн хамгийн томоохой зөвлөмж юм. Энэ нь клонлох эсвэл дараах секвентингийн шаблон үүсгэхэд зориулсан үед зөвхөн зөв үр дүнтэй байх шаардлагатай боломжийг олгодог. Түүний ажиллах чадвар нь том ДНХ-уудыг амжилттай копируулахад тусалж, бүх геномын удирдах стратегитэй холбоотой клонлох эсвэл SDA/LMDA технологиудыг ашигласан pyrosequencing технологи, жишээлбэл Roche-ийн GS FLX систем]. PCR-ээс өөрөөр Пфу ДНХ полимеразыг сайн дупликат үүсгэх шаардлагатай тохиолдолд зориулагдсан замын мутацид ашиглах боломжтой.

IV. Бусад ДНХ полимеразуудтай харьцуулах анализ

Pfu ДНХ нь Taq эсвэл Vent зэрэг бусад ДНХ полимеразуудтой харьцуулбал зөв шалгах үйлдлийн чадварыг дээшлүүлж, олон удаа амьдарч болох чадвартай. Pfu нь үнэхээр үнэтэй, цаг агаарын дотор байдаг тул Taq нь зөв шалгах функцүүдийг лавлахгүй учраас их зөрчлийн үйлдлээр хэрэглэх боломжгүй. Төрөл бүрийн их зөрчлийн энзимүүд байгаа боловч, Pfu-тай адилхан хамгийн их жишээ нь Vent ДНХ полимераз юм. Энэ нь Pfu-тай адилхан хэмжээнд амьдарч болох чадваргүй тул их температурт хэрэглэхэд хямд байдаг.

V. Pfu ДНХ полимераз ашиглахад гарч ирэх загварууд ба тодорхойлолтууд

Гэхдээ ажиллах үед PFU ДНК полимераз өнөгдсөн нь ихэвчлэн хялбар биш байх болно, түүнийг ашиглахад илүү их хамааралтай үр дүн гарах магадлал байгаа. Жишээлбэл, засварын үйл ажиллагааны үед PCR үр дүнтэй харьцуулахад алдаатай polymerase-уудтой харьцуулбал үр дүн багасна. Мөн, Pfu DNA polymerase-ийн хамгийн сайн ажиллах нөхцөлийг шингэtnэ гэвэл хоёр удааны цагаан эмч, pH-ийн нөхцөл зэрэг стриктно регулийн туршлууд байна. Түүнчлэн энэ enzyme-ийг ашиглах нь олон салбарын үндсэн ажилуудад эсвэл судлаачид бодож буй зарим үнэт цэгцтэй ажлуудад дор хаяж үнэтэй байх боломжтой.

VI. Зарим үеийн харилцаа болон нэвтрүүлэл

Pfu DNA polymerase-ийн шинэчлэлт хувилбаруудыг технологийн өссөнөөр хамгийн сайн үр дүнгээрээ эсвэл дутуу үнэтэй болгоход зориулж ажилладаг байдаг. Протейн инженерчлэл нь үйл ажиллагааны үр дүнг нэмэгдүүлэхэд эсвэл молекуляр биологийн шинэ арга замуудад хамгийн сайн ажиллахад зориулагдсан байдаг. Мөн, Pfu DNA pol-ийн ажиллаж буй нөхцөлийг илүү томъёолсон талаарх мэдлэг нэмэгдэхэд нанотехнологи, синтетик биологи жишээлбэл өөр арга замуудад ашиглах боломжийг нэвтрүүлэх боломжтой.

VII. Дүгнэлт

Дүгнэлт нь, Pfu DNA polymerase нь молекуляр биологийн талбайд өргөн зорилгоор ашиглагддаг бөгөөд энэ нь үнэн зөв үр дүнтэй болон хамгаалалтай байдлыг олгорлоно. Энэ нь DNA секвенцийг ихэнхээр зөв шинжилгээний зорилгоор ашигладаг бөгөөд лабораторит диагностикийн үндсэн хэрэгслүүдийн нэг юм. Генетик зохицуулалтын санхүүгийн хязгаарыг нээж байгаа үед, Pfu DNA polymerase гэх мэт үнэн зөв ажиллах хэрэгслийг ашиглахад ихээхэн хэрэгтэй болж, одоогийн биологийн шинжлэх ухааны үзэл бодлогоор хамгийн чухал хэсэг болох ёстой.