M-MLV Эрсдлийн төгсгөл: Молекуляр биологийн хэрэгцээтэн арга

Багажтай биологиа нь ихэвчлэн холбогдох биокемикал үйл ажиллагааныг зөвлөхөөр тодорхойлогддог. Эдгээр дотор эхлүүлэгч төрөлөгчид нь маш их санаатай байдаг, иймд тэд нь RNA-г DNA руу шилжүүлэх чадвартай бөгөөд энэ нь эхлүүлэгч төрөлөгчийн үйл ажиллагааг харгалзан тохиромжтой болгоно. M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) Эхлүүлэгч төрөлөгч нь судалгаа, шинжилгээний үйл ажиллагаанд ашиглагддаг төрлийн нэг юм.

Мэдэх m-mlv эргэн шилжүүлэн бичмэл

M-MLV Реверс Транскриптаз нь Moloney Murine Leukemia Virus (Mo-MuLV)-аас гаралтай бөгөөд энэ вирус нь хүндтэй клетка дотор түүний геномыг дагуулж үржүүлэхэд энэ энзимийг ашигладаг. Энэ нь энзим нь RNA-г шаблон偲өөс cDNA (комплементар DNA) үүсгэх чанартай учраас молекулын клонлох, ген экспресcухын шинжилгээ болон вирусын үржүүлэлтийн механикмийг судлахад ихээр зориулагдсан утгатай байдаг. M-MLV-ийн хувилбар нь лабораторийн оронд хамгийн ялгаатай нөхцөлийн доод үед ч анхны үнэ цэнэтэйг нэмэгдүүлэх, үзүүлэлтийг сайжруулах зорилгоор дизайнаагдсан.

Нэмэлт үзүүлэлтүүд ба Нягт

Эрсдэлтэй болон санамсаргүй

M-MLV Эрсдлийн транскриптаасын нэг хамгаалалттай байдлын аюулгүй байдлыг өндөртэй эргэлзээтэй учраас хамгийн бага алдаа гаргах боломжтой. Иймд энэ нь генетик информацииг эрсдлийн транскрипцдийн үед хадгалж, ген ур чадварын судалгаандаа зөвхөн шинжилгээнд зориулагдсан үр дүнг олгоход тусална. Мөн өндөр санхүүгийн тулд ихэвчлэн бага тооны RNA молекулуудыг тодорхойлоход зориулагдсан ба редкийн транскриптуудыг эсвэл бага хэмжээний ген экспресстүүдийг судалж болно.

Эрсдлийн нөхцөл байдлын хурдан өөрчлөлт

Мөн мэдэгдэж байгаа нь M-MLV Эрсдлийн транскриптаас нөхцөл байдлын ялгаатай үед ч амжилттай ажилладаг. Тэгээд температур, pH-ийн өөрчлөлт, солионд хувьслагдах нөхцөлүүд нь ёсоор ажиллахад хамаарахгүй бөгөөд энэ нь ихэнх лабораторийн ажиллагаанд зориулагдсан байдаг. Иймд үзүүлэгчид өөрийн протоколуудыг зориулж боловсруулж, ажиллагааны үр дүнг өндөртэй болгож, дахин дахин ажилладаг.

Урт хэсгүүдтэй хамт兰ах чадвар

Бусад RT-уудтай адил биш m-mlv эргэн шилжүүлэн бичмэл урт RNA молекулуудыг дөнгөж cDNA-руу түргэнчлэх чадвартай. Энэ нь мессенжер RNA (mRNA)-аас cDNA либрайс үүсгэхэд эсвэл их генүүдийг клонлоход ихээр тусламж өгдөг. Иймд M-MLV Reverse Transcriptase дөнгөж cDNA хуулбаруудыг үүсгэж, ген хөдөлгөөний профилинг болон функцын шинжилгээг хангалттай болгодог.

Эрдэм шинжилгээ, шалгатгаж буй зорилгоор ашиглах

Ген хөдөлгөөний шинжилгээ

M-MLV Reverse Transcriptase ашиглан mRNA-г cDNA-руу шилжүүлэх нь qPCR (квантификацийн полимераз цеп реакц) зэрэг техникүүдээр mRNA тогтмолдлыг тооцоолоход ихээр үнэтэй. Иймд шинжлэх ухаанчид ялгаатай давтамж, хувьсагчдын доод шатанд ямар ч гэнүүдийн хөдөлгөөний тогтмолдолыг харьцуулах боломжтой бөгөөд эцсийн үйл ажиллагааг, хворшийн механиктын талаар мэдээлэл авах боломжтой.

Клонлох, молекул шинжлэх ухаан

M-MLV Эрсдэл төгсгөл нь РНХА шаблонуудаас бүтэн урттай сДНК-ийг үүсгэх чадвартай учраас клонлох орчны ажиллагаанд хамааралгүй байдаг. Шинжлэх ухаанын эрдэмтэд энэ нь тодорхой генүүдийг илрүүлэх, векторуудад автоном анализ хийхэд эсвэл хybridization-аар судалгаа хийхэд зориулсан cDNA-ийн сангийг үүсгэх боломжийг олгодог.

Вирусын шинжлэх ухаан

Бусад ретровирустай адил, M-MLV Эрсдэл төгсгөл ашигладаг шинжлэх ажлууд нь ретровирусын дөрвөлжин, эмзэг байдлыг судалдаг. Эдгээр шинжилгээ нь вирусын геномууд яаж оролцдог, ямар үйлчилгээг үзүүлдэг, хворшийн эрүүл мэнд яаж буурдаг вэ гэдгийг анхаарна. Энэ нь вирус хамгаалах эмчилгээ, вакцин боловсруулахад тусалдаг.

Дүгнэлт

M-MLV Эрсдэл хөрвүүлэгч нь молекулын биологийн шинжилгээ, шалгуурлагын талбайд ихэнх зориулалтыг өөрчилсөн чанаршилтай, санамсаргүй энзим гэж энэ дүгнэлтэд тодорхойлогдсон юм. Энэ нь өндөр зөрчлийн төлөвөөр, хувьсагчдын нөөцтэй, хариуцлага хүртээмжтэй байгаа учраас ген экспресийн шинжилгээ, клонлох орчин, вирологиийн тухайн арга болох юм. Шинжлэх ухааны судалгааны хөдөө авсан ямар ч талбартай ч М-MLV Эрсдэл хөрвүүлэгч нь молекулын биологийн ажилтны хэрэгслээрээ хөрш байдалд байна.