M-MLV урвуу скрибингийнzyme-ийн анхны бодис, молекулар биологид дахь хэрэглээ

Энзимүүд нь молекуляр биологийн өөрчлөх хамгааллагын талбайд хамгийн томоохон биешилтэй байгаа химийн хувьсгалын амьдралд цөөнгүй хамрагддаг. m-mlv эргэн шилжүүлэн бичмэл (M-MLV RT)-ийн энзим нь эдгээр ихэнхээс нэг болох, RNA шаблонуудаас cDNA синтезлэх чадвартай байгаа учраас сүүлийн үеийн анхны тэмцээнд орж ирсэн юм. Энэ энзим нь Молони Мурин Лейкеми (M-MLV) вирустай харилцаандаа ген бусгах, өөрчлөлтийн шинжилгээ болон функцын геномын судалгаагад зориулж лабораторид дундаж ашигладаг.

M-MLV Буцаах Транскриптаасын Хэлбэр ба Функцын

M-MLV Буцаах Транскриптаас нь DNA-д хамаарсан DNA polymerase-ийн үйл ажиллагаагаар RNA-д хамаарсан DNA polymerase болон ribonuclease H (RNase H) үйл ажиллагаатай ажилладаг. Энэ нь RNA шаблонуудыг дагаж cDNA страндуудыг синтезлэхэд dNTP-үүдийг ашигладаг. M-MLV RT-ийн RNase H үйл ажиллагаа нь cDNA синтез дараа RNA шаблоныг буруулахад тусалж, ерөнхийд single-stranded cDNA-ийг үүсгэнэ.

M-MLV Буцаах Транскриптаасын Ашиглал

cDNA Үүсгэх: M-MLV RT-ийг ашиглан хэрэглэгчид RNA-ын мөрдөгчдийг cDNA руу шилжүүлэх тодорхой процедуур болгон бүтээдэг. Энэ нь Quantitative PCR, Ген экспрес хийх анализ эсвэл cDNA сангийг байгуулах зорилгоор дараагийн судалгаанд хамаарах ёстой.

Ген Клонын үйлдэл: М-MLV RT-ийг ашиглан шинжлэхээний эмчилгээнүүд RNA образцаас тодорхой генүүдийг клонолоход боломжтой. Иймд тодорхой генүүдийг тусгаарлаад ихээхэн байдлыг нэмэгдүүлээд функцийн талаар дахин шинжилгээ хийх боломжтой.

Экспресийн анализ: qPCR эсвэл микросхемын анализ зэрэг экспресийн анализийн техникүүдийн нэг үндсэн алхам нь RNase H активитиаар дамжуулан cDNA үүсгэх юм. Энэ замаар шинжлэхээний эмчилгээнүүд биологийн образцдаас генүүд ямар чиглэлээр зохион байгууллагдаж буйг шалгаж, генүүдийн регулируулалтыг эсвэл функцыг тайлбарлахад туслана.

Функционал геномик: Функционал геномикид хамаарч, M-MLV RT нь бүхэлхөн RNA багцадаас cDNA сангуудыг зохицуулахад ашиглагддаг. Эдгээр санг нь үзсэн тодорхой функцын эсвэл фенотиптэй генүүдийг шалгаж, генний функцын болон холбогдох нэгдлийн шинэ мэдээлэл олгоно.

Эрхэм байдал болон төсөөлөгдөл

M-MLV Бусад дараах нягтлан, зорилттай, дахин дахин давтагддаг байдлын ур чадвартай. Гэхдээ, энэ энзим нь зөвхөн зөвхөн температур, pH утга болон солиингийн концентрацийн зөв шартайгаар ажилладаг. cDNA үүсгэх үед M-MLV RT-ийн RNase H активчдын тулд RNA шаблон буурч, илүүтэй болон ялгарах нөхцөлийг хамааруулж болно.

Дүгнэлт нь, M-MLV Эрсдэлийн Транскриптаас нь молекулар биологийн судалгаанд RNA шаблонуудаас cDNA үүсгэхэд зориулагдсан арга хэмжээнүүдэд туслах зориулж бүтээгдсэн. Ген клонлох, илэрхийлэл судалгаа болон функцын геномын судалгаанууд M-MLV RT -д тулгуурлан ажилладаг вэ? Энэ нь RNA-д хамаарах DNA полимераз болон RNase H активигүйгээр өөр реверс транскриптазуудын дунд урьдчилан үзүүлэх үндсэн үзэгчид юм. Энзимийн активигүйн шаардлага болон түүнд холбогдох хязгааруудыг санаж байгаа нь М-MLV RT-ийн эрчимтэй ашиглахад шинж чанарыг ген функцийн болон регуляцийг молекулар түвшинд харахад тусална.