Pfu DNA Полимераз: Молекуляр биологийн өөрчлөлт, биотехнологийн гол чиглэл

Хүчирхэг байгалийн шинжлэх ухаан, молекул шинжлэх ухааны талбайд орчин үеийн үндсэн хөгжлийн нэг болон зориулалтын арга хэмжээнд чухал ажилладаг нь энзим юм. Энэ нь ихэвчлэн ашиглагдсан чухал энзим нь PFU ДНК полимераз . Энэ энзим нь Пирококкус фуриосус гэдэг хамгийн их хувийн температурт амьдардаг бактеридээс гаралтай бөгөөд энэ нь өөр DNA полимеразуудаас ялгаатайгаар хамгийн их үнэтэй үзэгдэлтэй байдаг тул молекул шинжлэх ухааны тодорхой арга хэмжээнд маш ашигтай.

Pfu DNA полимеразын үзэгдэл:

Энэ Pfu DNA полимеразын томъёоны үзэгдэл нь дэлхий даяарх молекул шинжлэх ухааны лабораторит ашиглагдахад ихээр ашигтай болсон.

1.Алдаануудыг засах чадвар: Pfu DNA полимераз нь өөрөөсөө ялгаатай байдаг нь өөрчлөгдөөд 3'-5' эксонуклеазын үзэгдэлтэй байдаг учраас өөрийн ажилыг шалгаж болно. Иймд PCR-ийн үржүүлэх үед алдаатай нуклеотидуудыг идэвхжүүлэхийг тодорхойлоход тусалж, алдааны хурд нь засваргүй полимеразтай харьцуулахад багасна.

2. Хүчирхэг шинж: Энэ нь их хэмжээний хамгаалагдсан эмчийн байгууллагын амьтны үндэсэнд байрладаг учраас, Pfu DNA polymerase нь их хэмжээний хамгийн их температур дээр стабил байдаг. Энэ нь 95°C (203°F) температур дээр ч анхны үйл ажиллагаа хадгалдаг бөгөөд PCR-ийн GC богино зургийн эсвэл урт зургийн удирдахад зориулагдсан үйл ажиллагаануудад үнэн зөв шаардлагатай.

3. Зөвхөн бодит: Proofreading арга болон хүчирхэг шинж нь Pfu DNA polymerase-ийн зөвхөн бодит түвшинг Taq polymerase-ээс ихээхүүн болгоход тусалдаг. Энэ нь зөвхөн бодит байдлыг ихээхүүн хэмжээнд шаарддаг клонлох, генетик зохицуулалтын үйл ажиллагаанд зориулагдсан бөгөөд энэ ферментийг ашиглахад алдаа хэмжээ нь Taq polymerase-ийг ашигласан тохиолдолд харьцуулахад ихээхүүн байдаг.

Pfu DNA Polymerase-ийн үйл ажиллагаа:

Эдгээр үнэ цэнэтэй үзэгдлийн хувьд PFU-DNA-polymerase-ийн үнэн зөв үйл ажиллагааны өргөтгөлөөр молекулар биологийн ямар нэгэн арга хэмжээнд хэрэглэгдэхийг хязгаарласан:

1.PCR Эхлүүлэгч: Pfu DNA polymerase PCR эхлүүлэгчийн амьдарсан фермент юм. Үүнийг ихэвчлэн зохион байгуулалтын баталгаажуулалтад хэрэглэдэг учраас энэ нь өндөр тодорхойлолтуудыг агуулж, үр дүнгээ шалгах чадвартай. Тухайн баталгаажуулалтын үр дүнгээ зөвхөн зөв байдлаар гаргахад маш том жишээ болно. Мөн өөр ферментүүдэд магадгүй байдаг GC-рийн их утгыг эсвэл урт утгыг зөвхөн энэ нь эргүүлэхэд маш сайн ажилладаг.

2.Клонын үйлдвэрлэл ба Ген хамааралтай өөрчлөлт: Pfu DNA polymerase-ийн хамгийн бага алдаануудын тоо нь клонын үйлдвэрлэлээс гадна site-directed mutagenesis шинжилгээнд хэрэглэгдэхэд их санаа үзүүлдэг учраас алдаатай өөрчлөлтүүд үр дүнтэй хамаарахгүй байхад маш сайн ажилладаг.

3.DNA секвенцид: Энэ нь Pfu DNA polymerase секвенцийн үр дүнг нөөцөөрөө орчин үеийн template-д зөвхөн зөв байдлаар илэрхийлэхэд хэрэглэгддэг.

ПФУ ДНХА полимераз нь зөв шалгах чадвар, хашаатай байдлын үр дүнгээр молекуляр биологийн тусам маш их өөрчлөлт үзүүлсэн. Энэ нь PCR-ийн удирдлагын үндсэн арга болон клонлох, ДНХА-г дарааллах зэрэг том хэмжээний ашигтай бөгөөд молекуляр биологийн судалгааны өмнөх үеийн хөгжлийн гол хувь болж байна. Технологийн өөрчлөлтөөр PFU-DNA-полимераз гэх мэт их зөв бодит эрэлттэй энзимийн хэрэглээ нэмэгдэх болно. Иймд энэ нь молекуляр биологийн талбарт олон жил болж чухал хэрэгслүүдийн нэг болох ёстой.