Il ruolo della m-mlv reverse transcriptase nella sintesi del CDNA

m-mlv trascrittasi inversaè un enzima popolare in biologia molecolare che catalizza la trascrizione dell'RNA in DNA complementare (cdna) ed è derivato dal virus della leucemia murina di Moloney. è un enzima essenziale per la clonazione e il sequenziamento dei geni e anche per trovare i suoi usi negli studi sull'espressione

applicazioni in biologia molecolare

uno degli usi più comuni della m-mlv reverse transcriptase è nell'area degli studi di espressione genica. Si effettua spesso con la trascrizione inversa di mrna che è mRNA convertibile in cdna consentendo la stima dei livelli di espressione dei geni attraverso pcr quantitativo (qpcr). Inoltre, questo enzima è

vantaggi e limitazioni

La m-mlv reverse transcriptase ha alcuni vantaggi, tra cui la capacità di consentire un'elevata processività e fedeltà, che sono desiderabili nella sintesi di molecole lunghe di CDNA. Tuttavia, ci sono alcuni svantaggi con questo enzima, tra cui il grado in cui alcune strutture esistenti nel mod

tecniche e protocolli

Per utilizzare efficacemente la M-MLV Trascrittasi inversa, è necessario prestare particolare attenzione a fattori come la scelta dei primer, la temperatura di reazione e la composizione del tampone tra gli altri. I primer devono essere costruiti in modo tale che non ci siano anse a forcina e che il legame al modello di RNA sia massimizzato. Considerata ottimale per una reazione enzimatica, 42°C è una temperatura comune per tali reazioni in modo che l'attività e la stabilità dell'enzima siano ottimali. Al contrario, l'uso di altre sostanze comeinibitori della rnaasipuò anche preservare l'RNA che verrebbe degradato durante la reazione.

prospettive future

Il miglioramento della biotecnologia ci aiuterà anche a progredire ulteriormente nell'uso della m-mlv reverse transcriptase. Le nuove strategie disponibili oggi includono la costruzione di enzimi modificati da ingegneri con le proprietà desiderabili che sono state prodotte. Inoltre, questa tecnologia può essere combinata con l'attuale

In sintesi, la m-mlv trascriptasi inversa costituisce una caratteristica essenziale nell'indagine di biologia molecolare per l'importanza che ha per l'introduzione del CDNA nelle cellule.