poliaminofosfato di potassio (CAS RN 1344-24-6)

poli-a polimerasi(PAP) è un'azione enzimatica chiave responsabile dell'aggiunta della coda poli-A all'estremità 3' delle molecole di RNA. Questa attività ha un ruolo significativo nella stabilità complessiva, nel trasporto e nella traduzione dell'RNA. Nel contesto del NGS, tuttavia, il PAP consente l'aggiunta dell'oligo A ai campioni di RNA prima del sequenziamento in modo che possano essere acquisiti dati di alta qualità da varie fonti di RNA.

L'importanza dell'aggiunta della coda poli A

Ci sono molti vantaggi associati all'incorporazione della coda poli A all'mRNA. Prima di tutto, la coda A aiuta a migliorare la stabilità delle molecole di RNA contro l'attività delle ribonucleasi da parte delle esonucleasi. In secondo luogo, la coda poli A ha un ruolo nell'inizio della traduzione attraverso la promozione dell'attacco del ribosoma all'mRNA. Nel caso delle preparazioni NGS, l'mRNA con coda poli A può essere facilmente utilizzato per un'analisi più mirata dell'espressione genica insieme alle variazioni trascrizionali poiché possono essere specificamente arricchiti.

Preparazione del campione NGS

I flussi di lavoro NGS includono la preparazione dei campioni di RNA che comportano i seguenti passaggi: trascrizione inversa, costruzione di cDNA e amplificazione. È anche comune aggiungere la polimerasi Poly A durante la sintesi del cDNA per includere una coda poly-A nelle molecole di cDNA finali. Questa modifica è fondamentale per l'amplificazione e il sequenziamento delle librerie poiché aumenta l'efficienza dei passaggi coinvolti nella preparazione delle librerie.

Applicazioni in RNA-Seq

La PAP è anche molto utile nelle applicazioni di sequenziamento RNA (RNA-Seq) perché consente un arricchimento più efficiente per l'mRNA con coda poly A. Questo aiuta a catturare un'immagine più chiara del trascrittoma dell'organismo in studio. Pertanto, tale miglioramento può aiutare a determinare geni espressi in modo differenziale, eventi di splicing alternativi o anche RNA non codificanti. Inoltre, includere la PAP nelle preparazioni NGS consente di ottenere dati più promettenti.

Aggiungere PAP nelle preparazioni NGS può migliorare notevolmente la qualità e l'accuratezza dei dati di sequenziamento. Ciò che è più importante, man mano che la ricerca continua a progredire, l'importanza di PAP per consentire agli scienziati di indagare sul trascrittoma rimarrà fondamentale.