An Ról Iomlánach Pfu DNA Polymerase i gCéimice Mhóil

I. Réamhrá chuig PFU DNA póilimeáis

Is é an poliméar DNA Pfu faoi láthair ceann de na rudaí is gá i gcúrsaí béicil, féinseán atá déanta ón bactarín uathuighinteach Pyrococcus furiosus. Tá an t-ainmhithe go leor glóir tharraite aici mar d'fhéadfadh a fíodaitheachta agus a phróiseasaitheacht íocaíocht mhaith a chur in iúl saor i gcás beagnach gach feabhsú, ón fheabhsú PCR go réacsaí idirghníomhacha. I gcomparáid leis an poliméar Taq a bhfuil cáineanna ar siúl, is féidir le poliméar DNA Pfu cóip chóir a dhéanamh ar DNA le cúram mhór, agus seo ag tabhairt faoi láthair cúnamh iontach faoi mhutáiníochtaí le linn an chóipeálaigh.

II. Nádúrtha Poliméar DNA Pfu

Téarma éagsúil a dearbhaíonn an poliméar DNA Pfu ná éadromsála. Fanann sé gníomhach ag teochtaí chomh airde ag 95°C, rud atá ar fad comhfhoclóir le cúiseanna a mbeadh orthu feabhsuitheacht éadromsála i ngairid ardteochta a thabhairt faoi deara, mar shampla PCR fada agus PCR dícheallach. Ar nós sin, tá gníomh proofreading exonuclease ó 3' go dtí 5' aige a méadasann a chosmhartha chóipithe. Mar sin, nuair a chuirear béas míchéimeacha isteach le linn an síntéise, féadfadh an poliméar DNA Pfu iad a aithint agus a chinntiú chun go mbeidh an phróduct íoctha chomh gairid leis ann ná an téama bunaidh féin.

III. Feidhmíocht na Poliméar DNA Pfu san Aistriúchán Moleacúlach

Tá cuid mhór de na teicníocach biolóige móil in ann úsáid a dhéanamh den poliméar Pfu DNA ar son na gcuíbachtaí speisialta atá acu. Is éasca an fíodálúchán ard a chuireann an tiomantas seo ar fáil sa PCR, agus is tábhachtaí í seo nuair a gcuirtear béim ar chúram ar nós san aclóna nó go háirithe i gcás cruthú templaí don scagadh díchlíche. Cuirimid isteach freastalacht maith a chumasann cóipithe mór DNÁ a chur i bhfeidhm go soiléir, a bhfuil neart acu don straitéis meaitseach gníomhach ollmhuintire faoi aclóna nó modhnaithe eile mar SDA/LMDA a úsáidtear i gcás teicneolaíochtaí pyroscagadh mar Roche GS FLX chóras]. Gan aon nód PCR, tá úsáid eile againn don poliméar Pfu DNA mar site-directed mutagenesis, áit a chumasann an chóipithe cinnte cúigreacht a chur isteach i gcás amháin gan aon mímisteachtaí a thabhairt arís.

IV. Anailís Chomparatúil le Poliméaracha DNA Eile

Is ionannach an cumhacht rianú agus an tuarascáil teasa ag Pfu DNA polymerase ná ag eileannaí DNA polymerase eile mar Taq nó Vent. I gcomparáid le Pfu a bhfuil sé níos cothrom leis an gcost agus níos lánghnách, níl na fionchumhachtaí rianú ag Taq, mar sin ní hionann leis i gcinneadh uasail fíodálacha. Mar sin féin, cé go bhfuil eileannaí eile ard-fhíodálacha mar vent DNA polymerase, ní féidir leis an téarma chéanna a choimeád ar chor ar bith mar atá ag Pfu, mar sin ní heol don úsáid i dteagmhálaíochtaí ard-teamhair.

V. Dífhostaithe agus Meastacháin i dTástal le Pfu DNA Polymerase

Ach ag obair le PFU DNA póilimeáis is féidir go mbeidh sé dócha ina dhiaidh na méid míoraimh atá ag tarlú leis. Mar shampla, is féidir gur chuireann a chuidniú faoi deara chuig thorthaí níos ísle i rith réigiún PCR i gcomparáid le poliméraisí atá fágtha in éadan earráid. Ar nós sin, beagnachonn an comhréir Pfu DNA poliméarás cinneadh réigiún oiriúnach mar phríomh-riachtanais ar ionsaí dívalant agus pH a bheidh ráitis láidir. Ina chontae arís, is coscach nach bhfuil úsáid den eangach seo cinnte ach scileanna móra nó coistrí cearta a bheith ag foilsithe ó thaobh taighdeoirí.

VI. Pailseáin agus Meon Nua amach

Is féidir leathanaigh nua den chineál Pfu DNA poliméarás a fhorbairt lena n-ábharaithe níos fearr nó costas níos lú mar a thiocfaidh téicneolaíocht chun cinn. Is féidir le hinginneriú prótéine a chur i gcás chun tuiscint nó dul chun cinn a chur ar aghaidh i gcás nua atá ag teacht ar ais sa réamh-thaighde moladula. Le cúram níos láidre againn faoi choinníollacht Pfu DNA pol, beidh seansanna níos mó againn chun úsáid a bhaint as an obair seo i réimsí eile mar nanotéicneolaíocht nó béarlagh síntise.

VII. Conclúid

Chun a chríochnú, is fíor bríomhar an polymeáras DNA Pfu san ábhar beagaireachta moladaraí de bharr a chuidiúchán speisialta agus a éadromacht. Déanann sé é sin uasal luachmhar don iarchéim agus don úsáid dianach freisin trí shraith síneadh DNA a chóipniú le heolas mór. Mar gheall ar dtacaíonn na sciantóirí níos faide le cúlraí géinítice, ní héagarfaidh ach an méid atá againn ag úsáid ferráin mar pholymeáras DNA Pfu agus déanfaidh sé é sin níos tábhachtaí dúinn anois agus i gcónaí i gcás staidéar na n-eolaíochtaí béil.