An ról agus iarratas M-MLV reverse transcriptase san ábhar beaglannaíochta

Tá enzaimí i lár gach faoi láthair reacsaí beochúimneacha i dtaobh an raon tábhachtach agus bréige de bhiotléarscáil moladach. m-mlv reverse transcriptase (M-MLV RT), a chuirtear ar cheann de na n-enzaimí seo, tugtar faoi fheabhs go leor air le déanaí mar tá sé in ann cDNA comhshocrú ón gcóras RNA. Úsáidtear an enzaim atá faighte ó Fhiúin Leiceamóireachta Múraine (M-MLV) go leor i gcás clónáil gheimhridh, anailís eangach agus staidéar géaimhseach fiontanasach sa mhéid a dhéantar i ngléaslaistigh taighde.

An Struchtúr agus an Feidhm de M-MLV Ath-Trasaáil

Feidhmíonn M-MLV Ath-Trasaáil mar pholimerás DNA leathan-DNA agus bíonn feidhm RNA-leathan DNA polimerása agus RNase H acu. Aithníonn sé córas RNA agus cruthónn sé sraithean cDNA ag úsáid dNTPs mar shubstraít. Is é sin nach n-úsáidear RNase H le déanamh dréimreacha RNA a scartadh tar éis an tsraith cDNA a chruthú, lena réitigh cDNA aonchréim.

Úsáidí M-MLV Ath-Trasaáil

Síntéiz cDNA: Is fhiúchláracha comhuaisleachta M-MLV RT na hábhar is gairid úsáideacha do theipeadh RNA i gcDNA. Tá an téicneolas seo ró-thábhachtach don scagán de chuid staidéar thíos lena n-áirítear PCR uimhirithe, anailís eisprioc gineálach nó bunú libear cDNA.

Clónáil Ghine: Trí bhaint úsáid as M-MLV RT is féidir le tiomnaithe gineálacha clón a dhéanamh ó shamplaí RNA. Mar thoradh, d'fhéadfadh gineálacha spéisí a sheachaint agus a mhéadú mar go mbeidh sé ar fáil iad a n-analasú níos faide maidir le feidhm.

Anailís Eisprioc: Tá an síntéiz cDNA mar pháirt thábhachtach den chóras anailíse eisprioc mar shampla qPCR nó anailís microarray trí saothar enaimh RNase H. Trí chonair seo, tá deis ag sceinceir a fháil chun tuiscint a fháil ar chomh éifeachtúil atá na gineálacha ag cur i láthair go hiomlán i smaoineata biolóigeach ag tacú le tuairisc ar réigiún agus feidhm na ngineál.

Géanamh Feidhmíoch: In géanamh feidhmíoch, úsáidear RT M-MLV chun librianna cDNA a chur ar fáil ó phopulaíoní RNA coimpléascach. Ansin scrínítear na librianna seo don bhunsraith gineálacha nó phainéadlaíocht speisialta chun tuiscint nua ar fheabhsú gineál agus comhréir a léargas.

Buntáistí agus Meastacháin

Tá cúigsteanna éagsúla ag RT M-MLV Aosrúchán mar earráid uasleasaithe, speisialtacht agus athraitheacht. Ach ba chóir nódú go gcuirtear an tiomantas i bhfeidhm faoi shonruithe áirithe cosúil le teampall oiliúna, luach pH mar aon le comhdhéanach sórt. Féadfadh deacracht RNase H an tiomantais M-MLV RT a chur i gcás riamh dílúb den templead RNA a mholann sé cúnamh agus ceartlann ar an gceangal cDNA atá ag tarlú.

In éadrom, is instrúid uasáil é M-MLV Reverse Transcriptase san rannpháirtíocht beolachta moladaraí chun cDNA a chruthú ón gcóras RNA mar thoradh ar iarracht. Bíonn brú láidir ar M-MLV RT ag staidí gineála, anailís eangach agus staidéar genómics fiontracha, mar gheall ar bhfuil aige na ngníomhanna RNA-depending DNA polymerase agus RNase H; seo iad tuiscintí speisialta idir na transcriptáisí eile. Leis sin i gcuimhne faoi riachtanais gníomhachta na n-innamh agus na comhshocrúcháin ina n-áit, féadfann tiomnaithe úsáid an phobal M-MLV RT chun tuiscint fhadhb gene funchtion agus réigiún ar leibhéal moladaraí.