poly a polymerase trong các chế phẩm trình tự thế hệ tiếp theo (ngs)

poly a polymerase(PAP) là một hoạt động enzym chính chịu trách nhiệm thêm đuôi poly-A vào đầu 3’ của các phân tử RNA. Hoạt động này có vai trò quan trọng trong sự ổn định tổng thể, vận chuyển và dịch mã của RNA. Tuy nhiên, trong khuôn khổ của NGS, PAP cho phép thêm oligo A vào các mẫu RNA trước khi giải trình tự để dữ liệu chất lượng cao từ các nguồn RNA khác nhau có thể được thu thập.

Ý Nghĩa Của Việc Thêm Đuôi Poly A

Có nhiều lợi ích gắn liền với việc kết hợp đuôi poly A vào mRNA. Trước hết, đuôi A giúp tăng cường sự ổn định của các phân tử RNA chống lại hoạt động của ribonuclease bởi exonucleases. Thứ hai, đuôi poly A có vai trò trong việc khởi đầu dịch mã thông qua việc thúc đẩy sự gắn kết của ribosome vào mRNA. Trong trường hợp chuẩn bị NGS, mRNA có đuôi poly A có thể dễ dàng được sử dụng cho phân tích biểu hiện gen tập trung hơn cùng với các biến thể phiên mã vì chúng có thể được làm giàu một cách cụ thể.

Chuẩn Bị Mẫu NGS

Các quy trình NGS bao gồm việc chuẩn bị các mẫu RNA liên quan đến các bước sau: phiên mã ngược, xây dựng CDNA và khuếch đại. Cũng thường thấy việc thêm Poly A polymerase trong quá trình tổng hợp CDNA để bao gồm một đuôi poly-A trong các phân tử cDNA cuối cùng. Sự điều chỉnh này rất quan trọng cho việc khuếch đại và giải trình tự thư viện vì nó tăng cường hiệu quả của các bước liên quan trong việc chuẩn bị các thư viện.

Các ứng dụng trong RNA-Seq

PAP cũng rất hữu ích trong các ứng dụng giải trình tự RNA (RNA-Seq) vì nó cho phép làm giàu hiệu quả hơn cho mRNA có đuôi poly A. Điều này giúp nắm bắt một bức tranh rõ ràng hơn về trình tự phiên mã của sinh vật đang được nghiên cứu. Do đó, sự cải thiện như vậy có thể giúp xác định các gen biểu hiện khác nhau, các sự kiện cắt ghép thay thế, hoặc thậm chí là các RNA không mã hóa. Hơn nữa, việc bao gồm PAP trong các chuẩn bị NGS cho phép thu được dữ liệu hứa hẹn hơn.

Việc thêm PAP vào các chuẩn bị NGS có thể cải thiện đáng kể chất lượng và độ chính xác của dữ liệu giải trình tự. Quan trọng hơn, khi nghiên cứu tiếp tục tiến triển, tầm quan trọng của PAP trong việc cho phép các nhà khoa học điều tra transcriptome sẽ vẫn là chính.