M-MLV reverse transcriptazasi molekulyar biologiyada roli va uning tadbiqlari

Enzimlar, molekulyar biologiya sohasi kabi doim o'zgaruvchan maydon bilan bog'liq bo'lgan turli biohimiyaviy reaksiyalarda markaziy rol oynaydi. m-mlv reversiv transkriptaza (M-MLV RT) enzimi shu enzimlardan biri hisoblanadi va soʻngi vaqtlarda RNA shablonlardan cDNA sintezini amalga oshirishi mumkinligi sababli ko'p qiziqish tomonidan ajratilgan. U Moloney Murine Leukemiya Virusidan (M-MLV) olinadigan va gen klklonlashi, ifoda analizi va funktsional genomik tadqiqotlari kabi laboratoriyalar tomonidan bajariladigan boshqa muammolarga ega bo'lgan extensiv ishlatiladi.

M-MLV Teskari Transcriptaza Strukturasiga va Funksiyasiga Doir

M-MLV Teskari Transcriptaza RNA-shablonlarni tanib oladi va dNTP lar sifatida substratlardan foydalanib cDNA sirtlarining sintezini bajaydi va DNA-ga asoslangan DNA polimerazi va ribonuklease H (RNase H) faoliyatiga ega bo'lgan DNA-ga asoslangan DNA polimerazisi sifatida ishlaydi. M-MLV RT ning RNase H faoliyati cDNA sintezi keyin RNA shablonining yugurilishini ta'minlaydi va buning natijasida bitta jihatli cDNA yaratiladi.

M-MLV Teskari Transcriptazaning Tadbiqlari

cDNA синтези: M-MLV RTdan фойдаланувчи тескери транскрипция усуллари RNA мазмумларини cDNAга ай兰тириш учун кўп пайда бўлган ҳаракатларdir. Кейинги зуддаги таҳлиллар, Quantitative PCR, Ген экспрессияси таҳлили ёки cDNA кутубхонасини яратиш учун ушбу техника муҳимdir.

Ген клонлаши: M-MLV RTдан фойдаланувчilar RNA нусха эсларидан маҳsus генларни клонлашингиз мумкин. Натижада, маҳsus генлар ажраш ва йиғилдириш mumkin bo'lib, улар функцияси хасисатлари боёича кейин таҳлил этина олади.

Экспрессия таҳлили: qPCR ёки микромассив таҳлили кabi техникаларда RNase H фаолияти орқали энзим арқали cDNA синтези - бу бир неча таҳлил усулларида муҳим қадамdir. Ушбу ўрнингдаscientists генлар биологик нусхаларда қандай тафсиллиқда экспрессия этишлари билан танишishga va генлар регулировка ва функцияси дастурлари боёича таҳлил этмокдир.

Funksional genomika: Funksional genomikada, M-MLV RT kompleks RNA populyatsiyalaridan cDNA bibliotekalarni tayyorlash uchun ishlatiladi. Keyinchalik, bu bibliotekalar belgilangan funktsiyali yoki fenotipli kalplar bo'yicha tekshiriladi va shu jihatdan kalp funktsiyasi va ulashi haqida yangi ma'lumotlar paydo bo'ladi.

Foydalar va kuzatiladigan narsalar

M-MLV Orqaga Transkriptaziya bir necha qulaylikka ega, masalan, baland efeksiyati, spetsifikki va takrorlanishi. Ammo, ushbu enzym belgilangan shartlarda yaxshi ishlaydi, masalan, optimal temperatura, pH qiymatlari hamda salt koncentrasiyasi kabi shartlarda ishlashini eslashtirish kerak. Bazen cDNA sintezida M-MLV RT ning RNase H faoliyati sababli RNA shablonining pastkiqilishi sodir bo'lib, natijada hosil bo'lgan cDNA miqdori va sifati ga ta'sir yetkazadi.

Umuman olganda, M-MLV Reverz Transcriptaza molekulyar biologiyada tadqiqotlarda RNA shablonidan cDNA sintez etish uchun foydali asbob hisoblanadi va turli maqsadlar uchun ishlatiladi. Gen klonlashi, ifoda tahlili va funktsional genomik tadqiqotlari M-MLV RT ga bog'liq, chunki u hem RNA-ga muvofiq DNA polimerazi, hem hamda RNase H faoliyatiga ega; bu xossalari boshqa reverz transcriptazalar orasida unikaldir. Enzim faoliyati talablari va uning bilan bog'liq cheklar haqida eslayotgan holda, tadqiqotchilar M-MLV RT ning quvvatidan foydalanib, jin funksiyasi va regulatsiyasini molekulyar darajada tushuna oladilar.