Ribonukleaz Inhibitori, RNase inhibitori 40U ul

rekombinant odam platsentali Ribonuclease Inhibitor, 40U/μl

Manba

E. coli shirikasi rekombinant klonni ifodalaydi, bunda odam platsentali Ribonuclease Inhibitor geni joylashtirilgan.

Mutaxassislik

40 U/μl.

Vahidning belgilash usuli

Bitta vahid ribonuklease A ning faoliyatini 5 ng gacha 50% darajada to'xtatish uchun talab qilinadigan Recombinant Ribonuclease Inhibitor miqdori sifatida aniqlanadi.

Faoliyat ribonuklease A yordamida cytidine 2’3’-tsiklik monofosfatni hidroliz qilishdan oldin o'ldiriladi.

Saqlash bufferi

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(h/h) glyserol

Saqlash

-20°C da saqlang

Sifatni tekshirish

Endonuklezaning yo'qligi
1μg Lambda DNA, 200 unit Ribozanaza Inhibitori bilan 37°C da 16 soat inkubatsiyadan o'tkaziladi.
Inkubatsiya dan keyin, Lambda DNA, etidium brom-stirov agaroz gelida butun holatda ko'rinishini olib, nazoratli Endonukleza yo'qligini tekshirish uchun ishlatiladi.

Nikasenining yo'qligi
1μg I turdagi superzavitan pBR322, 200 unit Ribozanaza Inhibitori bilan 37°C da 4 soat inkubatsiyadan o'tkaziladi.
Inkubatsiya dan keyin, superzavitan DNA, etidium brom-stirov agaroz gelida nikalash yoki kesishishning yo'qligini tekshirish uchun ko'rishga yetarlicha.

Ekzonuklezaning yo'qligi
1μg Lambda DNA/HindIII belgilari, 200 unit Ribozanaza Inhibitori bilan 37°C da 16 soat inkubatsiyadan o'tkaziladi.
Inkubatsiya dan keyin, Lambda DNA/HindIII belgilari 1% agaroz gilda ajratiladi va etidium brom bilan ranglangan. Belgilar butun bandlar sifatida saqlangan, smearing yo'q.

RNase va latentskiy RNase mavjud emas
RNase faoliyati mavjud bo'lishini tekshirish uchun, 1ug RNA-ni Ribonuklease Inhibitorining 200 birlik bilan 37°C da 4 soat inkubatsiyaga o'tkaziladi.
Inkubatsiya dan so'ng, ko'rinishda RNase mavjud emasligini tekshirish uchun, RNA-ni etidium bromid bilan ranglangan agarose gel-da butun band sifatida ko'rsatiladi.
Latentskiy RNase faoliyati mavjud bo'lishini tekshirish uchun, Ribonuklease Inhibitorining 200 birlikni 70°C da 15 daqiqa guruhlandiriladi va 1ug RNA-bilan 37°C da 4 soat inkubatsiyaga o'tkaziladi.
Inkubatsiya dan so'ng, ko'rinishda RNase mavjud emasligini tekshirish uchun, RNA-ni etidium bromid bilan ranglangan agarose gel-da butun band sifatida ko'rsatiladi.

Jismoniy tozalik

SDS-poliakrilamid gel bilan Coomassie blue ranglanganda tozalik ≥95% hisoblanadi.

Foydalanish qoidasi

Ribonuklease Inhibitor pH ning keng oraliqda (pH5.5-9) faol hisoblanadi. Standart RT va in vitro transkriptsiya uchun Ribonuklease Inhibitorining oxirgi konsentratsiyasi 1u/ul hisoblanadi.

buyurtma