keyingi avlod sekvensiyalash (ngs) preparatlarida poli a polimerazasi

poli a polimerazasi(PAP) RNA molekulalarining 3’ oxiriga poly-A dumini qo'shish uchun mas'ul bo'lgan asosiy fermentativ faoliyatdir. Ushbu faoliyat RNA ning umumiy barqarorligi, transporti va tarjimasi uchun muhim rol o'ynaydi. Biroq, NGS doirasida PAP RNA namunalariga sekvensiyalashdan oldin A oligonukleotidini qo'shishga imkon beradi, shunda turli RNA manbalaridan yuqori sifatli ma'lumotlar olinishi mumkin.

Poly A Dumini Qo'shishning Ahamiyati

mRNA ga poly A dumini qo'shish bilan bog'liq ko'plab afzalliklar mavjud. Birinchidan, A dumini RNA molekulalarining ribonukleaza faoliyatiga nisbatan barqarorligini oshirishda yordam beradi. Ikkinchidan, poly A dumini mRNA ga ribosoma bog'lanishini rag'batlantirish orqali tarjima boshlanishida rol o'ynaydi. NGS tayyorgarliklari holatida, poly A-dumli mRNA gen ifodasi tahlilini yanada diqqatli o'tkazish uchun osonlik bilan ishlatilishi mumkin, chunki ular maxsus ravishda boyitilishi mumkin.

NGS Namuna Tayyorlash

NGS ish jarayonlari quyidagi bosqichlarni o'z ichiga olgan RNA namunalarini tayyorlashni o'z ichiga oladi: teskari transkripsiya, CDNA qurilishi va amplifikatsiya. CDNA sintezi davomida oxirgi cDNA molekulalarida poly-A quyruqni qo'shish uchun Poly A polimerazani qo'shish odatiy holdir. Ushbu o'zgartirish kutubxona amplifikatsiyasi va sekvensiyalash uchun juda muhim, chunki bu kutubxonalarni tayyorlashda ishtirok etuvchi bosqichlarning samaradorligini oshiradi.

RNA-Seq'dagi ilovalar

PAP RNA sekvensiyalash (RNA-Seq) ilovalarida ham juda foydali, chunki bu poly A-quyruqli mRNA uchun yanada samarali boyitishni ta'minlaydi. Bu o'rganilayotgan organizmning aniq transkriptom darajasidagi tasvirini olishga yordam beradi. Shunday qilib, bunday yaxshilanish farqlanadigan ifodalangan genlarni, alternativ splicing hodisalarini yoki hatto kodlamaydigan RNKlarni aniqlashda yordam berishi mumkin. Bundan tashqari, NGS tayyorgarliklarida PAPni qo'shish yanada umidli ma'lumotlarni olish imkonini beradi.

NGS tayyorgarliklarida PAP qo'shish sekvensiya ma'lumotlarining sifatini va aniqligini sezilarli darajada yaxshilashi mumkin. Eng muhimi, tadqiqotlar davom etar ekan, olimlarga transkriptomani o'rganish imkonini beruvchi PAPning ahamiyati katta bo'lib qoladi.