رائبونیکلیز انہیبٹر، RNase انہیبٹر 40U ul

ریکمبنٹانٹ مینشیا پلسنتا ریبو نیوکلیز انہیبٹر، 40U/μl

ماخذ

ایچ کولی استرین جو ایک ریکمبنٹ کلون کو ظاہر کرتا ہے جو مینشیا پلسنتا سے ریبو نیوکلیز انہیبٹر گین کو حامل ہے۔

سانچہ

40 U/μl.

یونٹ کی تعریف

ایک یونٹ کو اس مقدار کے طور پر تعریف کیا جاتا ہے جو ریکمبنٹ ریبو نیوکلیز انہیبٹر کی ضرورت ہوتی ہے کہ ریبو نیوکلیز A کی سرگرمی کو 50 فیصد تک روک دے۔

سرگرمی کو ریبو نیوکلیز A کے ذریعہ cytidine 2'3'-cyclic monophosphate کے هیدرولیسس کی روکاوٹ سے پیمائی جاتی ہے۔

استوریج بفر

20mM HEPES-KOH(PH7.6)، 50mM KCl، 8mM DTT، 50%(v/v) گلائسرول

اسٹوریج

پر کھانا -20°C

کوالٹی کنٹرول

اینڈونیوکلیز کی موجودگی نہیں
1μg لامڈا ڈین ایچ ڈیبیلیس کو 37°C پر 16 گھنٹے تک رائبو نیوکلیز انہیبٹر کے ساتھ انکوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکوبیشن کے بعد، لامڈا ڈین ایچ ڈیبیلیس کو ایتھیڈیم براومائیڈ-ستارہ ایگاروس گیل پر مکمل طور پر دیکھا جاتا ہے تاکہ وضاحت کی جائے کہ دیکھنے والے اینڈونیوکلیز کی موجودگی نہیں ہے۔

نکیس کی موجودگی نہیں
1μg ٹائپ آئی سپرکوائلڈ پی بی آر 322 کو 37°C پر 4 گھنٹے تک رائبو نیوکلیز انہیبٹر کے ساتھ انکوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکوبیشن کے بعد، سپرکوائلڈ ڈین ایچ ڈیبیلیس کو ایتھیڈیم براومائیڈ-ستارہ ایگاروس گیل پر دیکھا جاتا ہے تاکہ وضاحت کی جائے کہ دیکھنے والے نکنگ یا کٹنگ کی موجودگی نہیں ہے۔

ایکسونیوکلیز کی موجودگی نہیں
1μg لامڈا ڈین ایچ ڈیبیلیس/ہنڈ III مارکرز کو 37°C پر 16 گھنٹے تک رائبو نیوکلیز انہیبٹر کے ساتھ انکوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکوبیشن کے بعد، لامڈا ڈین ایچ ڈیبیلیس/ہنڈ III مارکرز کو 1% ایگاروس گیل سے الگ کیا جاتا ہے اور ایتھیڈیم براومائیڈ سے رنگ دیا جاتا ہے۔ مارکرز مکمل طور پر بنديوں کے طور پر رہتے ہیں جبکہ سمیرنگ کے بغیر۔

RNase اور لاٹینٹ RNase کی موجودگی نہیں
RNase سرگرمی کی موجودگی کو ٹیسٹ کرنے کے لئے، 1 مکروگرام RNA کو 200 یونٹس Ribonuclease Inhibitor کے ساتھ 37°C پر چار گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکیوبیشن کے بعد، RNA کو ایثیڈیم براومائیڈ سے رنگ لگایے گئے ایگاروس گیل پر آلے ہوئے بنڈ کے طور پر دیکھا جاتا ہے تاکہ وضاحت کی جائے کہ نظری RNase غیر موجود ہے۔
پوشیدہ RNase سرگرمی کی موجودگی کو ٹیسٹ کرنے کے لئے، 200 یونٹس Ribonuclease Inhibitor کو 70°C پر 15 منٹ تک گرمی سے دھوتا دیا جاتا ہے اور 1 مکروگرام RNA کے ساتھ 37°C پر چار گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکیوبیشن کے بعد، RNA کو ایثیڈیم براومائیڈ سے رنگ لگایے گئے ایگاروس گیل پر آلے ہوئے بنڈ کے طور پر دیکھا جاتا ہے تاکہ وضاحت کی جائے کہ نظری RNase غیر موجود ہے۔

جسمانی صافی

صافی ≥95% ہے جیسا کہ SDS-پولیاکرائلیم گیل کومناسی بلیو رنگنے کے ذریعے جدgm کی گئی ہے۔

استعمال کی نوٹ

Ribonuclease Inhibitor وسیع pH رینج (pH5.5-9) میں سرگرم ہے۔ معیاری RT اور in vitro ترانسکرپشن میں Ribonuclease Inhibitor کو آخری تراکون 1u/ul پر استعمال کیا جاتا ہے۔

آرڈر