ریبونوکلیز انفیکٹر، آر این ایز انفیکٹر 40 یو یو

ریکومبیننٹ انسانی پلاسنٹا ربونوکلیز انفیکٹر، 40 یو/μ ایل

ماخذ

ای. کولی سٹریم جو ایک ریکومبینٹ کلون کا اظہار کرتا ہے جو انسانی مشکوک سے ربونوکلیز روکنے والے جین کو لے جاتا ہے۔

حراستی

40 یو/ایم ایل

یونٹ کی تعریف

ایک یونٹ کو ریبونوکلیز اے کے 5 این جی کی سرگرمی کو 50 فیصد تک روکنے کے لئے ریکومبیننٹ ریبونوکلیز انفیکٹر کی ضرورت کی مقدار کے طور پر بیان کیا گیا ہے۔

سرگرمی کو سائٹائڈین 23- سائیکلک مونو فاسفیٹ کی ہائیڈولائز کی روک تھام کے ذریعے ریبونوکلیز اے کی طرف سے ماپا جاتا ہے.

ذخیرہ کرنے کا بفر

20 ملی میٹر ہیپس کوہ (ph7.6) ، 50 ملی میٹر کلور، 8 ملی میٹر ڈی ٹی ٹی، 50 فیصد گلیسرول (v/v)

ذخیرہ

-20°C پر محفوظ کریں

کوالٹی کنٹرول

اینڈونوکلیز کی عدم موجودگی
لیمبڈا ڈی این اے کا 1μg 200 یونٹس ریبونوکلیز انفیکٹر کے ساتھ 37°C پر 16 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکیوبیشن کے بعد، لامبڈا ڈی این اے کو ایتھڈیم برومائڈ سے رنگے ہوئے ایگروز جیل پر برقرار ہونے کے طور پر دیکھا جاتا ہے تاکہ یہ معلوم ہو سکے کہ اندرونی نیوکلیز موجود نہیں ہے۔

نیکاز کی عدم موجودگی
1μg قسم I supercoiled pbr322 200 یونٹس ribonuclease inhibitor کے ساتھ 37 °C پر 4 گھنٹے کے لئے incubated ہے.
انکیوبیشن کے بعد، سپر وولڈ ڈی این اے کو ایتھڈیم برومائڈ سے رنگے ہوئے ایگروز جیل پر دیکھا جاتا ہے تاکہ یہ معلوم ہو سکے کہ کوئی نمایاں نشان یا کٹ نہیں ہے۔

ایگزونوکلیز کی عدم موجودگی
لیمبڈا ڈی این اے/ہندی آئی آئی مارکرز کے 1μg کو 200 یونٹس ریبونوکلیز انفیکٹر کے ساتھ 37°C پر 16 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکیوبیشن کے بعد، لامبڈا ڈی این اے/ہندی آئی آئی مارکرز کو 1 فیصد اگروز جیل سے الگ کیا جاتا ہے اور ایتھڈیم برومائڈ سے رنگا جاتا ہے۔ مارکرز بغیر کسی ملبہ کے برقرار بینڈ کے طور پر رہتے ہیں۔

rnase کی عدم موجودگی اور پوشیدہ rnase
rnase سرگرمی کی موجودگی کے لئے ٹیسٹ کرنے کے لئے، rnase کی 1ug 200 یونٹس ribonuclease inhibitor کے ساتھ 37 °C پر 4 گھنٹے کے لئے incubated ہے.
انکیوبیشن کے بعد، RNA کو ایتھڈیم برومائڈ سے رنگے ہوئے ایگروز جیل پر ایک برقرار بینڈ کے طور پر دیکھا جاتا ہے تاکہ یہ معلوم ہو سکے کہ کوئی بھی نظر آنے والا rnase موجود نہیں ہے۔
لیٹنٹ آر این ایز سرگرمی کی موجودگی کی جانچ کرنے کے لئے، 200 یونٹس ربونوکلیز انفیکٹر کو 70 °C پر 15 منٹ تک گرمی سے منقطع کیا جاتا ہے اور 37 °C پر 1 یوگ آر این اے کے ساتھ 4 گھنٹے تک انکیوبیٹ کیا جاتا ہے۔
انکیوبیشن کے بعد، RNA کو ایتھڈیم برومائڈ سے رنگے ہوئے ایگروز جیل پر ایک برقرار بینڈ کے طور پر دیکھا جاتا ہے تاکہ یہ معلوم ہو سکے کہ کوئی بھی نظر آنے والا rnase موجود نہیں ہے۔

جسمانی پاکیزگی

پاکیزگی ≥95٪ ہے جو کوماسی نیلے رنگ کے رنگ کے ساتھ ایس ڈی ایس-پولیاکریلامائڈ جیل کے ذریعہ فیصلہ کیا گیا ہے۔

استعمال کا نوٹ

ریبونوکلیز انفیکٹر وسیع پی ایچ رینج (پی ایچ 5.5-9) پر فعال ہے۔ معیاری آر ٹی اور ان وٹرو ٹرانسکرپشن میں ریبونوکلیز انفیکٹر کا استعمال 1 یو/ یو ایل کی حتمی حراستی میں کیا جاتا ہے۔

حکم