اگلی نسل کے سیکوینسنگ (این جی ایس) کی تیاریوں میں پولی ایک پولیمراز

پولی اے پولیمراز(PAP) ایک اہم انزیمی عمل ہے جو RNA مالیکیولز کے 3’ سرے پر پولی-A دم شامل کرنے کے لیے ذمہ دار ہے۔ یہ سرگرمی RNA کی مجموعی استحکام، نقل و حمل، اور ترجمے میں اہم کردار ادا کرتی ہے۔ تاہم، NGS کے دائرے میں، PAP RNA نمونوں میں ترتیب دینے سے پہلے A اولیگو کے اضافے کی اجازت دیتا ہے تاکہ مختلف RNA ذرائع سے اعلیٰ معیار کے ڈیٹا حاصل کیے جا سکیں۔

پولی A دم شامل کرنے کی اہمیت

mRNA میں پولی A دم کے شامل کرنے کے کئی فوائد ہیں۔ سب سے پہلے، A دم RNA مالیکیولز کی استحکام کو رائبو نیوکلیز کی سرگرمی کے خلاف بڑھانے میں مدد دیتی ہے۔ دوسرا، پولی A دم ترجمے کی شروعات میں کردار ادا کرتی ہے کیونکہ یہ mRNA کے ساتھ رائبو زوم کی جڑت کو فروغ دیتی ہے۔ NGS کی تیاریوں کے معاملے میں، پولی A دم والی mRNA کو مخصوص طور پر مالیکیولر اظہار کے تجزیے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے کیونکہ انہیں خاص طور پر بڑھایا جا سکتا ہے۔

 NGS نمونہ تیاری

این جی ایس ورک فلو میں آر این اے نمونوں کی تیاری شامل ہے جس میں درج ذیل مراحل شامل ہیں: ریورس ٹرانسکرپشن، سی ڈی این اے کی تعمیر، اور ایمپلیفیکیشن۔ یہ بھی عام ہے کہ سی ڈی این اے کی ترکیب کے دوران پولی اے پولیمرائز شامل کیا جائے تاکہ حتمی سی ڈی این اے مالیکیولز میں پولی-اے ٹیل شامل کی جا سکے۔ یہ ترمیم لائبریری کی ایمپلیفیکیشن اور سیکوینسنگ کے لیے اہم ہے کیونکہ یہ لائبریریوں کی تیاری میں شامل مراحل کی کارکردگی کو بڑھاتی ہے۔

آر این اے-سیک میں درخواستیں

پی اے پی آر این اے سیکوئنسنگ (آر این اے-سیک) کی درخواستوں میں بھی بہت مفید ہے کیونکہ یہ پولی اے ٹیل والے ایم آر این اے کے لیے زیادہ موثر امیر بنانے کی اجازت دیتا ہے۔ یہ زیر مطالعہ جاندار کی واضح ٹرانسکرپٹوم کی سطح کی تصویر کو پکڑنے میں مدد کرتا ہے۔ اس طرح، اس طرح کی بہتری مختلف طور پر اظہار کیے گئے جینز، متبادل اسپlicing کے واقعات، یا یہاں تک کہ غیر کوڈنگ آر این اے کی شناخت میں مدد کر سکتی ہے۔ مزید برآں، این جی ایس کی تیاریوں میں پی اے پی کو شامل کرنے سے زیادہ امید افزا ڈیٹا حاصل کرنے کی اجازت ملتی ہے۔

این جی ایس کی تیاریوں میں پی اے پی کا اضافہ تسلسل کے ڈیٹا کے معیار اور درستگی کو بہت بہتر بنا سکتا ہے۔ اس سے بھی زیادہ اہم بات یہ ہے کہ جیسے جیسے تحقیق جاری رہتی ہے، سائنسدانوں کو ٹرانسکرپٹوم کی تحقیقات کرنے کی اجازت دینے کے لیے پی اے پی کی اہمیت بڑی رہے گی۔