Рибонуклеаза Інгібітор, Інгібітор RNase 40Е мкл

рекомбінантний людський плацентарний інгібітор рибонуклеази, 40U/μl

джерело

Штам E. coli, що виражає рекомбінантну копію гену інгібітора рибонуклеази з людської плаценти.

Концентрація

40 U/μl.

Визначення одиниці

Одна одиниця визначається як кількість рекомбінантного інгібітора рибонуклеази, необхідна для інгібування діяльності 5 нг рибонуклеази A на 50%.

Діяльність вимірюється шляхом інгібування гідролізу цитидину 2’3’-циклічного монофосфату рибонуклеазою A.

Буфер зберігання

20мM HEPES-KOH(PH7.6), 50мM KCl, 8мM DTT, 50%(v/v) глицерин

Сховище

Зберігати при -20°C

Контроль якості

Відсутність ендонуклеази
1μg ДНК Лямбда інкубуються з 200 одиницями інгібітора рибонуклеази протягом 16 годин при 37°C.
Після інкубації, ДНК Лямбда виявляється незміненою на агарозному гелі, забарвленому бромовою етیدіумом для підтвердження відсутності видимої ендонуклеази.

Відсутність нікейз
1μg типу I надвитківого pBR322 інкубуються з 200 одиницями інгібітора рибонуклеази протягом 4 годин при 37°C.
Після інкубації, надвиткову ДНК виявляють на агарозному гелі, забарвленому бромовим етідіумом, щоб підтвердити відсутність видимих розрізів або зрізів.

Відсутність ексонуклеази
1μg маркерів ДНК Лямбда/HindIII інкубуються з 200 одиницями інгібітора рибонуклеази протягом 16 годин при 37°C.
Після інкубації, маркери ДНК Лямбда/HindIII розділяються за допомогою 1% агарозного геля та забарвлюються бромовим етідіумом. Маркери залишаються у вигляді цілих смуг без розмазування.

Відсутність RNase та латентної RNase
Для перевірки наявності діяльності RNase, 1μg РНК є інкубованим з 200 одиницями Инhibiтору Рибонуклеази протягом 4 годин при 37°C.
Після інкубації, РНК визуалізується як цілий пас у гелі агарози, забарвленому бромовою етідіумом, для підтвердження відсутності видимої RNase.
Для перевірки наявності латентної діяльності RNase, 200 одиниць Инhibiтору Рибонуклеази денатуруються при 70°C протягом 15 хвилин і інкубуються з 1μg РНК протягом 4 годин при 37°C.
Після інкубації, РНК визуалізується як цілий пас у гелі агарози, забарвленому бромовою етідіумом, для підтвердження відсутності видимої RNase.

Фізична чистота

Чистота склада ≥95% за оцінкою методом SDS-поліакріламідного гелевого електрофорезу з забарвленням кобальтовим блакитом.

Примітки до використання

Инhibiтор Рибонуклеази активний у широкому діапазоні pH (pH5.5-9). Стандартне RT та in vitro транскрипція використовує Инhibiтор Рибонуклеази з кінцевою концентрацією 1μ/μl.

замовлення