Ribonükleaz inhibitörü, rnase inhibitörü

Rekombinant insan plasenta ribonükleaz inhibitörü, 40 u/μl

Kaynak

İnsan plasentasından ribonükleaz inhibitörü genini taşıyan rekombinant klonu ifade eden e. coli suşları.

konsantrasyon

40 u/μl.

Birim tanımı

Bir birim, rekombinan ribonükleaz inhibitörünün 5ng ribonükleaz a'nın etkinliğini %50 oranında inhibe etmesi için gerekli miktar olarak tanımlanır.

Aktivite, sitidin 23-siklik monofosfatın ribonükleaz a tarafından hidrolizinin inhibe edilmesiyle ölçülür.

depolama tamponu

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, % 50 (v/v) gliserol

depolama

-20°C'de saklanmalıdır

kalite kontrolü

Endonükleaz yokluğu
1μg lambda DNA, 200 birim ribonükleaz inhibitörü ile 37°C'de 16 saat boyunca inkube edilir.
İnkubaasyondan sonra lambda DNA'sı, görünür endonüklezin yokluğunu doğrulamak için etidyum bromürle boyanmış agarose jeline sağlam olarak görüntülenir.

Nikase yok
1μg tip i süper sarmal pbr322, 200 birim ribonükleaz inhibitörü ile 37°C'de 4 saat boyunca inkube edilir.
İnkubasyon sonrası, görülebilir kesim veya kesimlerin yokluğunu doğrulamak için süper sarmal DNA, etidyum bromürle boyanmış bir agaroz jelinde görselleştirilmektedir.

Eksonükleaz yok
1μg lambda DNA/hindiii belirteçleri, 200 birim ribonükleaz inhibitörü ile 37°C'de 16 saat boyunca inkube edilir.
İnkubasyon sonrası lambda DNA/hindiii belirteçleri %1 agarose jeli ile ayrılır ve etidyum bromürle boyanır. belirteçler, boyanmadan sağlam bantlar olarak kalır.

rnase ve gizli rnase yokluğu
rnase aktivitesinin varlığını test etmek için, 1 ug rna, 200 birim ribonükleaz inhibitörü ile 37°C'de 4 saat boyunca inkube edilir.
İnkubaasyondan sonra, görünür rnazin yokluğunu doğrulamak için, RNA, etidyum bromürle boyanmış agaroz jeline sağlam bir bant olarak görüntülenir.
Latent rnase aktivitesinin varlığını test etmek için, 200 birim ribonükleaz inhibitörü 70°C'de 15 dakika boyunca ısı denatürüne alınır ve 1 ug rna ile 37°C'de 4 saat inkubasyon yapılır.
İnkubaasyondan sonra, görünür rnazin yokluğunu doğrulamak için, RNA, etidyum bromürle boyanmış agaroz jeline sağlam bir bant olarak görüntülenir.

Fiziksel saflık

Temizlik, coomassie mavi boyanma ile sds-polyacrylamide jel ile değerlendirildiğinde % 95'dir.

Kullanım notu

Standart rt ve in vitro transkripsiyonda ribonükleaz inhibitörü 1 u/ ul' un nihai konsantrasyonunda kullanılır.

düzen