ang papel at mga aplikasyon ng m-mlv reverse transcriptase sa molecular biology

Ang mga enzyme ay naging pangunahing bahagi ng iba't ibang mga reaksiyong biokimika may kaugnayan sa laging dinamiko na larangan ng molecular biology.m-mlv reverse transcriptaseAng enzyme na ito na nakuha mula sa moloney murine leukemia virus (m-mlv rt), ay malawakang ginagamit sa pag-clone ng gene, pag-aaral ng ekspresyon at pag-aaral ng functional genomics bukod sa iba pang mga aplikasyon na isinasagawa ng mga laboratoryo sa pananaliksik.

ang istraktura at pag-andar ng m-mlv reverse transcriptase

Ang m-mlv reverse transcriptase ay gumaganap bilang isang DNA-dependent DNA polymerase na may parehong mga aktibidad ng rna-dependent DNA polymerase at ribonuclease h (rnase h). Kinikilala nito ang mga template ng rna at isinasagawa ang sintesis ng mga strand ng cdna gamit ang dntps

Mga aplikasyon ng m-mlv reverse transcriptase

CDNA synthesis: ang mga paraan ng inverse transcription na gumagamit ng m-mlv rt ay karaniwang mga pamamaraan na ginagamit para sa pagbabagong-anyo ng mga nilalaman ng RNA sa CDNA. Para sa mga pag-aaral sa ibaba kabilang ang quantitative PCR, pagsusuri sa ekspresyon ng gene o pagbuo ng isang CDNA library ang pamamaraan na ito ay

Pag-clone ng gene: sa pamamagitan ng paggamit ng m-mlv rt, maaaring i-clone ng mga mananaliksik ang mga partikular na gene mula sa kanilang mga sample ng RNA. Kaya, ang mga partikular na gene ay maaaring maiiwanan at mapalaki upang sila'y mas mai-analyze sa mga tuntunin ng pag-andar.

pag-aaral ng ekspresyon: isang mahalagang hakbang sa anumang mga pamamaraan ng pag-aaral ng ekspresyon tulad ng qpcr o microarray analysis ay nagsasangkot ng pag-synthesize ng cdnas na pinagtataguyod ng enzyme sa pamamagitan ng aktibidad nito ng rnase h. Sa pamamagitan ng mga paraan na ito ang mga siyentipiko ay

functional genomics: sa functional genomics, ang m-mlv rt ay ginagamit upang maghanda ng mga CDNA library mula sa mga kumplikadong populasyon ng RNA. Ang mga librarya na ito ay pagkatapos ay sinuri para sa mga gene na may mga tinukoy na function o phenotypes sa gayon ay nagbubunyag ng mga bagong pananaw sa function

mga pakinabang at mga pagsasaalang-alang

Ang m-mlv reverse transcriptase ay may ilang mga pakinabang tulad ng mataas na kahusayan, pagiging partikular at kakayahang mai-reproduce. gayunpaman, dapat tandaan na ang enzyme ay gumagana nang maayos sa ilalim ng mga tiyak na kondisyon tulad ng pinakamainam na temperatura, mga halaga ng ph pati na rin ang konsentrasyon ng asin. kung minsan

sa pagtatapos, ang m-mlv reverse transcriptase ay isang kapaki-pakinabang na kasangkapan sa pananaliksik sa molecular biology upang makabuo ng cdna mula sa mga template ng rna para sa iba't ibang mga application. Ang pag-clone ng gene, pag-aaral ng ekspresyon at pag-aaral ng functional genomics ay lubos na