Napaka dalisay na solusyon ng inhibitor ng ribonuclease - rnase inhibitor 40u/μl, pinakamainam para sa proteksyon ng rna sa synthesis ng cdna at mga aplikasyon sa molecular biology

paglalarawan ng produkto

Ipinapakilala ang aming Mataas na Purong Ribonuclease Inhibitor Solution, isang de-kalidad na reaktibo na nagtatampok ngrnase inhibitorsa ultra-concentrated na 40 Units/μl. Ang solusyong ito ay partikular na dinisenyo upang magbigay ng maximum na proteksyon laban sa ribonucleases sa panahon ng paghawak ng RNA sa iba't ibang pamamaraan ng molekular na biyolohiya.

mga pangunahing katangian

• pinoy: ang inhibitor ng ribonuclease ay ginawa sa pamamagitan ng rekombinant at mahigpit na pinuri upang matiyak ang mataas na antas ng kalinisan, na tinitiyak na walang pagkagambala sa iyong mga eksperimento.

• ultra-concentrated formula: ibinibigay sa 40u/μl na konsentrasyon, ang inhibitor na ito ay nagpapahintulot sa mahusay na paggamit sa mga hinihingi na aplikasyon kung saan kahit na ang mga bakas na halaga ng rnase ay maaaring makompromiso sa mga resulta.

• malawak na spektrum ng aktibidad: ang inhibitor ay epektibong nagpapahamak ng isang malawak na hanay ng mga rnases a, b, c, at iba pang mga endo- at exoribonucleases, na pinoprotektahan ang iyong mga sample ng RNA mula sa pagkasira.

• matatag at aktibong: na-formulate para sa katatagan sa isang hanay ng temperatura at kondisyon ng ph, ang inhibitor ay nananatili na aktibo sa panahon ng imbakan at sa buong iba't ibang mga protocol ng eksperimento.

• pagiging katugma: angkop para magamit sa mga automated system at mga reaksiyon na hand-prepared, ito ay ganap na katugma sa mga buffer at mga enzyme na karaniwang ginagamit sa mga disintesis ng CDNA at mga pamamaraan ng pagmamanipula ng nucleic acid.

mga aplikasyon

• CDNA synthesis: mahalaga para maiwasan ang kontaminasyon ng rnase sa panahon ng reverse transcription reactions, sa gayo'y pinahusay ang output at integridad ng synthesized CDNA.

• Pag-iisa at paglilinis ng RNA: mahalagang bahagi sa mga kit ng pag-aalis ng RNA at mga daloy ng trabaho sa paglilinis upang mapanatili ang integridad ng RNA bago at pagkatapos ng paghihiwalay.

• Northern blotting: tinitiyak ang mataas na kalidad na paglilipat at hybridization ng RNA sa pamamagitan ng pag-inhibit ng aktibidad ng rnase na maaaring magbawas ng RNA sa mga membrane.

• qpcr at rt-qpcr: pinoprotektahan ang mga template ng RNA sa quantitative pcr at reverse transcription quantitative pcr assays, na nagpapataas ng sensitivity at specificity.

• Mga pag-aaral ng mga pakikipag-ugnayan ng RNA-protein: pinapanatili ang mga molekula ng RNA sa panahon ng co-immunoprecipitation (rip) at iba pang mga eksperimento sa pakikipag-ugnayan ng RNA-protein.

pinagmulan

e. coli strain na nagpapahayag ng isang recombinant clone na nagdadala ng ribonuclease inhibitor gene mula sa placenta ng tao.

konsentrasyon

40 u/μl.

kahulugan ng yunit

Ang isang yunit ay tinukoy bilang ang halaga ng rekombinant na ribonuclease inhibitor na kinakailangan upang pigilan ang aktibidad ng 5ng ng ribonuclease a ng 50%.

Ang aktibidad ay sinusukat sa pamamagitan ng paghinto ng hydrolysis ng cytidine 23-cyclic monophosphate sa pamamagitan ng ribonuclease a.

buffer ng imbakan

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) glycerol

pag-iimbak

mag-imbak sa -20°c

kontrol sa kalidad

kawalan ng endonuclease

Ang 1μg ng lambda dna ay inkubado sa 200 yunit ng ribonuclease inhibitor sa loob ng 16 oras sa 37°c.

Pagkatapos ng pag-init, ang lambda DNA ay nakikita na buo sa isang ethidium bromide-stained agarose gel upang matiyak ang kawalan ng nakikita na endonuclease.

kawalan ng nikase

Ang 1μg ng pbr322 na supercoiled ng type i ay inkubado sa 200 yunit ng ribonuclease inhibitor sa loob ng 4 oras sa 37°c.

Pagkatapos ng pag-init, ang supercoiled DNA ay nakikita sa isang ethidium bromide-stained agarose gel upang matiyak na walang nakikita na mga nicking o cut.

kawalan ng exonuclease

Ang 1μg ng mga marker ng lambda dna/hindiii ay inkubado sa 200 yunit ng inhibitor ng ribonuclease sa loob ng 16 oras sa 37°c.

Pagkatapos ng pag-init, ang mga marker ng lambda DNA/hindiii ay hiwalay ng 1% agarose gel at pinakilab na may ethidium bromide. Ang mga marker ay nananatiling hindi nasira na mga banda nang walang pag-aalis.

walang rnase at latent rnase

upang subukan ang pagkakaroon ng aktibidad ng rnase, ang 1 ug ng rna ay inkubado sa 200 yunit ng ribonuclease inhibitor sa loob ng 4 oras sa 37°c.

Pagkatapos ng pag-init, ang RNA ay nakikita bilang isang buo na banda sa isang ethidium bromide-stained agarose gel upang matiyak ang kawalan ng nakikita na rnase.

upang subukan ang pagkakaroon ng latent na aktibidad ng rnase, 200unit ng inhibitor ng ribonuclease ay init-denatured sa 70°c sa loob ng 15 minuto at inubado sa 1ug ng rna sa loob ng 4 oras sa 37°c.

Pagkatapos ng pag-init, ang RNA ay nakikita bilang isang buo na banda sa isang ethidium bromide-stained agarose gel upang matiyak ang kawalan ng nakikita na rnase.

pisikal na kalinisan

ang kalinisan ay ≥95% ayon sa sds-polyacrylamide gel na may coomassie blue staining.

tala ng paggamit

Ang standard na rt at in vitro transcription ay gumagamit ng ribonuclease inhibitor sa isang pangwakas na konsentrasyon ng 1u/ ul.