บทบาทและการใช้งานของ m-mlv reverse transcriptase ในชีววิทยาโมเลกุล

เอนไซม์เป็นส่วนสําคัญของปฏิกิริยาชีวเคมีต่างๆ ในส่วนของสาขาชีววิทยาโมเลกุลที่มีความเคลื่อนไหวตลอดเวลาm-mlv reverse transcriptase การถ่ายทอดสารกลับ(m-mlv rt) ซึ่งเป็นหนึ่งในอีนซิมเหล่านี้ ได้รับความสนใจมากเมื่อเร็วๆ นี้ เนื่องจากมันสามารถสังเคราะห์ CDNA จากรังสี RNA. อีนซิมนี้ที่ได้รับจากไวรัสโรคสะเก็ดเงินของหนู Moloney (m-mlv) มีการใช้อย่างกว้างขวาง

โครงสร้างและหน้าที่ของ m-mlv reverse transcriptase

m-mlv reverse transcriptase มีหน้าที่เป็น DNA-dependent DNA polymerase ด้วยกิจกรรมทั้ง rna-dependent DNA polymerase และ ribonuclease h (rnase h) มันจําได้รุ่น RNA และดําเนินการสังเคราะห์เส้น CDNA โดยใช้ dntps เป็นสารย่อย

การใช้งานของ m-mlv reverse transcriptase

การสังเคราะห์ CDNA: วิธีการถ่ายทอดกลับที่ใช้ m-mlv rt เป็นวิธีการที่ใช้กันทั่วไปในการแปลงสารสารของ RNA เป็น CDNA สําหรับการศึกษาด้านล่างรวมถึง PCR ปริมาณ การวิเคราะห์การแสดงออกของพันธุกรรมหรือการสร้างห้องสมุด CDNA เทคนิคนี้

การคลอนพันธุกรรม: โดยใช้ m-mlv rt นักวิจัยสามารถคลอนพันธุกรรมเฉพาะจากตัวอย่าง RNA ของพวกเขาได้ ดังนั้นพันธุกรรมเฉพาะสามารถแยกและขยายเพื่อให้สามารถวิเคราะห์เพิ่มเติมในเรื่องของหน้าที่

การวิเคราะห์การแสดงออก: ขั้นตอนสําคัญในเทคนิควิเคราะห์การแสดงออกใด ๆ เช่น QPCR หรือวิเคราะห์ microarray รวมถึงการสังเคราะห์ CDNAS ที่ผ่านการปฏิสัมพันธ์ของเอนไซม์ผ่านกิจกรรม rnase h ของมัน

โจรพันธุกรรมการทํางาน: ในโจรพันธุกรรมการทํางาน m-mlv rt ใช้ในการเตรียมห้องสมุด CDNA จากประชากร rna ที่ซับซ้อน ห้องสมุดเหล่านี้จะถูกกรองให้มียีนที่มีฟังก์ชันหรือฟีโนไทป์ที่กําหนดไว้ โดย

ข้อดีและข้อพิจารณา

m-mlv reverse transcriptase มีข้อดีหลายอย่าง เช่น ประสิทธิภาพสูง ความเฉพาะและการผลิตใหม่ได้. อย่างไรก็ตาม, ควรสังเกตว่าเอนไซม์ทํางานได้ดีภายใต้สภาพเฉพาะอย่างยิ่ง เช่น อุณหภูมิที่ดีที่สุด, ค่า ph และปริมาณเกลือ. บางครั้งระหว่าง

ในที่สุด m-mlv reverse transcriptase เป็นเครื่องมือที่ช่วยในการวิจัยชีววิทยาโมเลกุลในการสังเคราะห์ CDNA จากรังกร RNA สําหรับการใช้งานต่าง ๆ การคลอนพันธุกรรม การวิเคราะห์การแสดงออกและการศึกษาพันธุกรรมการทํางานพึ่งพา m-mlv rt มาก