โพลีเอพอลิมเรซในยาเรียงลําดับรุ่นต่อไป (ngs)

โพลีเอ โพลีเมเรซ(PAP) เป็นการกระทำของเอนไซม์ที่สำคัญซึ่งมีหน้าที่ในการเพิ่มหางโพลี-เอไปยังปลาย 3’ ของโมเลกุล RNA กิจกรรมนี้มีบทบาทสำคัญต่อความเสถียรภาพโดยรวม การขนส่ง และการแปลของ RNA อย่างไรก็ตามภายในกรอบของ NGS PAP ช่วยให้สามารถเพิ่ม A โอลิโกไปยังตัวอย่าง RNA ก่อนการจัดลำดับเพื่อให้สามารถได้รับข้อมูลที่มีคุณภาพสูงจากแหล่ง RNA ที่หลากหลาย

ความสำคัญของการเพิ่มหางโพลี A

มีข้อดีมากมายที่เกี่ยวข้องกับการรวมหางโพลี A เข้ากับ mRNA ก่อนอื่นหาง A ช่วยเพิ่มความเสถียรของโมเลกุล RNA ต่อกิจกรรมของไรโบนิวคลีเอสโดยเอกโซนิวคลีเอส ประการที่สองหางโพลี A มีบทบาทในการเริ่มต้นการแปลโดยการส่งเสริมการยึดติดของไรโบโซมกับ mRNA ในกรณีของการเตรียม NGS mRNA ที่มีหางโพลี A สามารถนำไปใช้ในการวิเคราะห์การแสดงออกของยีนที่มุ่งเน้นมากขึ้นพร้อมกับความแปรผันของทรานสคริปต์ได้อย่างง่ายดายเนื่องจากสามารถเพิ่มขึ้นเฉพาะได้

การเตรียมตัวอย่าง NGS

การทำงานของ NGS รวมถึงการเตรียมตัวอย่าง RNA ที่เกี่ยวข้องกับขั้นตอนต่อไปนี้: การถอดรหัสย้อนกลับ, การสร้าง CDNA, และการขยายพันธุ์ นอกจากนี้ยังเป็นเรื่องปกติที่จะเพิ่ม Poly A polymerase ในระหว่างการสังเคราะห์ CDNA เพื่อรวมหาง poly-A ในโมเลกุล cDNA สุดท้าย การปรับเปลี่ยนนี้มีความสำคัญต่อการขยายพันธุ์ห้องสมุดและการจัดลำดับเนื่องจากช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของขั้นตอนที่เกี่ยวข้องในการเตรียมห้องสมุด

การใช้งานใน RNA-Seq

PAP ยังมีประโยชน์มากในแอปพลิเคชันการจัดลำดับ RNA (RNA-Seq) เนื่องจากช่วยให้การเสริมความเข้มข้นของ mRNA ที่มีหาง poly A มีประสิทธิภาพมากขึ้น ซึ่งช่วยในการจับภาพภาพรวมของทรานสคริปโทมที่ชัดเจนของสิ่งมีชีวิตที่กำลังศึกษา ดังนั้นการปรับปรุงดังกล่าวสามารถช่วยในการกำหนดยีนที่แสดงออกแตกต่างกัน, เหตุการณ์การสลับแบบทางเลือก, หรือแม้แต่ RNA ที่ไม่เข้ารหัส นอกจากนี้การรวม PAP ในการเตรียม NGS ยังช่วยให้ได้ข้อมูลที่มีแนวโน้มมากขึ้น

การเพิ่ม PAP ในการเตรียม NGS สามารถปรับปรุงคุณภาพและความถูกต้องของข้อมูลการจัดลำดับได้อย่างมาก สิ่งที่สำคัญยิ่งกว่านั้น เมื่อการวิจัยยังคงก้าวหน้า ความสำคัญของ PAP ในการอนุญาตให้นักวิทยาศาสตร์ตรวจสอบทรานสคริปโทมจะยังคงมีความสำคัญอยู่