Rnase- hämmare

Rekombinant human placenta ribonukleashämmare, 40 u/μl

Källa

E. coli-stam som uttrycker en rekombinant klon som bär ribonukleashämmaregen från mänsklig placenta.

koncentration

40 m/l.

Enhetsdefinition

En enhet definieras som den mängd rekombinant ribonukleashämmare som krävs för att hämma aktiviteten hos 5 ng ribonukleas a med 50%.

Aktiviteten mäts genom hämning av hydrolysen av cytidin 23-cykliskt monofosfat av ribonukleas a.

lagringsbuffert

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% (v/v) glycerol

Förvaring

Förvaras vid -20°c

Kvalitetskontroll

avsaknad av endonukleas
1 μg lambda-dna inkuberas med 200 enheter ribonukleashämmare i 16 timmar vid 37°c.
Efter inkubation visualiseras lambda-DNA som intakt på en ethidiumbromidfärgad agarosgel för att kontrollera att det inte finns synlig endonukleas.

brist på nikase
1 μg typ i superspårat pbr322 inkuberas med 200 enheter ribonukleashämmare i 4 timmar vid 37°c.
Efter inkubation visualiseras det superspinnade DNA:t på en agarosgel färgad med ethidiumbromid för att kontrollera att det inte finns synliga snitt eller skärningar.

frånvaro av exonukleas
1 μg av lambda-dna/hindiii-markörer inkuberas med 200 enheter ribonukleashämmare i 16 timmar vid 37°c.
Efter inkubation separeras lambda-DNA/hindiii-markörerna med 1% agarosgel och färgas med ethidiumbromid. Markörerna förblir intakta band utan att smörjas.

Avsaknad av rnaser och latent rnaser
För att undersöka närvaron av rnasaktivitet inkuberas 1 ug rna med 200 enheter ribonukleashämmare i 4 timmar vid 37°c.
Efter inkubation visualiseras RNA som intakt band på en ethidiumbromidfärgad agarosgel för att kontrollera att rnase inte är synlig.
För att undersöka närvaron av latent rnaseaktivitet, denatureras 200 enheter av ribonukleashämmare i värme vid 70°C i 15 minuter och inkuberas med 1 ug rna i 4 timmar vid 37°C.
Efter inkubation visualiseras RNA som intakt band på en ethidiumbromidfärgad agarosgel för att kontrollera att rnase inte är synlig.

fysisk renhet

renheten är ≥ 95% enligt sds-polyacrylamidgel med coomassieblå färgning.

Användningsnot

Den standardiserade transkriptionen och in vitro transkriptionen använder en ribonukleashämmare vid en slutkoncentration på 1 u/ ul.

Ordning