Poly a-polymerase i nästa generations sekvenserings (ngs) preparat

poly a-polymerase(PAP) är en nyckel enzymatisk åtgärd som är ansvarig för att lägga till poly-A svansen till 3’ änden av RNA-molekyler. Denna aktivitet har en betydande roll i den övergripande stabiliteten, transporten och översättningen av RNA. Inom ramen för NGS möjliggör dock PAP tillägg av A oligo till RNA-prover före sekvensering så att data av hög kvalitet från olika RNA-källor kan erhållas.

Betydelsen av att lägga till Poly A Tailing

Det finns många fördelar kopplade till införandet av poly A svans till mRNA. Först och främst hjälper A svansen till att förbättra stabiliteten hos RNA-molekyler mot ribonukleasaktivitet från exonukleaser. För det andra har poly A svansen en roll att spela vid översättningsinitiering genom att främja ribosomens fäste vid mRNA. I fallet med NGS-förberedelser kan poly A-svansade mRNA enkelt användas för mer fokuserad genuttrycksanalys tillsammans med transkriptvariationer eftersom de kan berikas specifikt.

 NGS Provberedning

NGS-arbetsflödena inkluderar förberedelsen av RNA-prover som involverar följande steg: omvänd transkription, cDNA-konstruktion och amplifikation. Det är också vanligt att tillsätta Poly A-polymeras under cDNA-syntesen för att inkludera en poly-A-svans i de slutliga cDNA-molekylerna. Denna modifiering är avgörande för bibliotekets amplifikation och sekvensering eftersom den ökar effektiviteten i de steg som ingår i förberedelsen av biblioteken.

Tillämpningar inom RNA-Seq

PAP är också mycket användbart i RNA-sekvensering (RNA-Seq) tillämpningar eftersom det möjliggör en mer effektiv berikning av poly A-svansade mRNA. Detta hjälper till att fånga en tydligare transkriptom-nivåbild av den studerade organismen. Således kan en sådan förbättring hjälpa till att bestämma differentierat uttryckta gener, alternativa splitsningshändelser eller till och med icke-kodande RNA. Vidare möjliggör inkluderingen av PAP i NGS-förberedelser att mer lovande data kan erhållas.

Att lägga till PAP i NGS-förberedelser kan kraftigt förbättra kvaliteten och noggrannheten på sekvenseringsdata. Vad som är ännu viktigare, när forskningen fortsätter att utvecklas, kommer betydelsen av PAP för att möjliggöra för forskare att undersöka transkriptomet att förbli stor.