Ribonuklease Inhibitor, RNase inhibitor 40J μl

rekombinantni inhibitor ribonukleaze človeškega plodne čebelice, 40U/μl

vir

Štrik E. coli, ki izraža rekombinantni klon, ki nosi gen inhibitorja ribonukleaze iz človeške plodne čebelice.

Koncentracija

40 U/μl.

Definicija enote

Enota je določena kot količina rekombinantnega inhibitorja ribonukleaze, ki jo potrebujemo za 50% zmanjšanje dejavnosti 5 ng ribonukleaze A.

Dejavnost je merjena s preprečevanjem hidrolize citozinske 2'3'-ciklične monofosfatne ribonukleaze A.

Shrani v tamnici

20mM HEPES-KOH (pH 7,6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50% (v/v) glicerol

SHRANJEVANJE

Shranjevaj pri -20°C

Kontrola kakovosti

Odsotnost endonukleaze
1 μg Lambda DNA je inkubiran s 200 enotami inhibitorja ribonukleaze v temperaturi 37 °C v roku 16 ur.
Po inkubaciji se Lambda DNA prikazuje kot nedotaknjeno na etidijevi bromidno obarvanem agarskem gelu, da se potrdi odsotnost vidne endonukleaze.

Odsotnost Nickase
1 μg superzavijanega pBR322 tipa I se inkubira z 200 enotami inhibitorja ribonukleaze v tesl 4 ure pri 37 °C.
Po inkubaciji se superzavijana DNA prikazuje na etidijevi bromidno obarvanem agarskem gelu, da se potrdi odsotnost vidnih razsečenj ali režanja.

Odsotnost exonukleaze
1 μg Lambda DNA/HindIII oznak se inkubira z 200 enotami inhibitorja ribonukleaze v tesl 16 ur pri 37 °C.
Po inkubaciji se Lambda DNA/HindIII oznake ločijo na 1% agarskem gelu in obarvajo z etidijevim bromidom. Oznake ostanejo kot nedotaknjene črte brez smearinga.

Odsotnost RNaze in latentne RNaze
Da se preveri prisotnost RNazne aktivnosti, se 1 μg RNA inkubira z 200 enotami inhibitorja ribonukleaze v tesl 4 ure pri 37 °C.
Po inkubaciji se RNA vidi kot nepoškodovana pika na agarskem gelu, ki je obarvan s etidijem bromida, da se potrdi odsotnost vidne RNaze.
Za preizkus prisotnosti skrite aktivnosti RNaze se 200 enot inhibitorja ribonukleaze denaturoira pri 70 °C v teploti 15 minut in ga inkubirajo z 1 μg RNA v temu 4 ure pri 37 °C.
Po inkubaciji se RNA vidi kot nepoškodovana pika na agarskem gelu, ki je obarvan s etidijem bromida, da se potrdi odsotnost vidne RNaze.

Fizična čistota

Čistota je ≥95%, kot jo ocenjuje SDS-poliakrilamidni gel s barvaniem Coomassie blue.

Opomba o uporabi

Inhibitor ribonukleaze je aktiven v širokem obsegu pH (pH 5,5-9). Standardni RT in transkripcija v vitro uporabljata inhibitor ribonukleaze pri končni koncentraciji 1 e/μl.

vrstni red