40 u ul

Rekombinantni zaviralci ribonukleaze človeške posteljice, 40 u/μl

vir

e. coli sev, ki izraža rekombinantni klon, ki nosi gen za zaviranje ribonuklease iz človeške posteljice.

koncentracija

40 u/μl.

opredelitev enote

ena enota je opredeljena kot količina potrebnega zaviralca rekombinantne ribonuklease, ki zavira aktivnost 5ng ribonuklease a za 50%.

Aktivnost se meri z zaviranjem hidrolize citidin 23-cikličnega monofosfata s ribonukleaso a.

skladiščni blažilnik

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% (v/v) glicerol

skladiščenje

shranjujte pri temperaturi -20°C

nadzor kakovosti

odsotnost endonukleaze
1 μg lambde DNK se inkubira s 200 enotami zaviralca ribonukleaze 16 ur pri 37°C.
po inkubaciji se lambda DNK prikaže kot nedotaknjena na agaroznem gelu z etidijevim bromidom, da se preveri odsotnost vidne endonuklease.

odsotnost nikasa
1 μg pbr322 tipa i v supervalji se inkubira s 200 enotami zaviralca ribonukleaze 4 ure pri 37 °C.
po inkubaciji se superzvitna DNK vizualizira na agaroznem gelu z etidijevim bromidom, da se preveri odsotnost vidnih odrezkov ali rezov.

odsotnost eksonukleaze
1 μg lambda dna/hindiii markerjev se inkubira s 200 enotami zaviralca ribonukleaze 16 ur pri 37°c.
po inkubaciji se lambda-dna/hindiii markerji ločijo z 1% agaroznim gelom in obarvajo z etidijevim bromidom.

odsotnost rnaze in latentna rnaza
Za testiranje na prisotnost aktivnosti rnaze se 1 ug rna inkubira s 200 enotami zaviralca ribonukleaze 4 ure pri 37 °C.
Po inkubaciji se RNA prikaže kot nedotaknjen trak na agaroznem gelu z etidijevim bromidom, da se preveri odsotnost vidne rnaze.
Za testiranje na prisotnost latentne aktivnosti rnaze se 200 enot zaviralca ribonukleaze 15 minut toplotno denaturira pri 70 °C in 4 ure inkubira z 1 ug rna pri 37 °C.
Po inkubaciji se RNA prikaže kot nedotaknjen trak na agaroznem gelu z etidijevim bromidom, da se preveri odsotnost vidne rnaze.

fizična čistost

čistež ≥ 95%, ki jo ocenjuje s sds-poliakrilamidskim gelom z modro barvo coomassie.

Opomba o uporabi

Standardna transkripcija in transkripcija in vitro uporablja zaviralca ribonukleaze v končni koncentraciji 1 u/ ul.

red