ингибиторы рибонуклеазы, ингибиторы рназы 40

рекомбинантный ингибитор рибонуклеазы плаценты человека, 40 у/μl

источник

штамм E. coli, экспрессирующий рекомбинантный клон, который несет ген ингибитора рибонуклеазы из плаценты человека.

концентрация

40 е/мл.

определение единицы

одна единица определяется как количество рекомбинантного ингибитора рибонуклеазы, необходимое для ингибирования активности 5ng рибонуклеазы а на 50%.

активность измеряется ингибированием гидролиза цитидина 23-циклического монофосфата рибонуклеазой а.

буфер хранения

20 мм гепес-кох ((ph7.6), 50 мм клл, 8 мм дтт, 50% (в/в) глицерина

хранение

хранить при температуре -20°С

контроль качества

отсутствие эндонуклеазы
1 мкг Ламбда-ДНК инкубируется с 200 единиц ингибитора рибонуклеазы в течение 16 часов при температуре 37°C.
После инкубации, Ламбда ДНК визуализируется как нетронутая на геле агарозы, окрашенном бромадом этидия, для проверки отсутствия видимой эндонуклеазы.

отсутствие никазы
1 мкг сверхсвернутого pbr322 типа I инкубируют с 200 единиц ингибитора рибонуклеазы в течение 4 часов при 37°C.
после инкубации сверхсвернутую ДНК визуализируют на геле агарозы, окрашенном в бромид этидия, чтобы проверить отсутствие видимых уколов или порезов.

отсутствие экзонуклеазы
1 мкг маркеров Ламбда-ДНК/индии инкубируется с 200 единиц ингибитора рибонуклеазы в течение 16 часов при 37°C.
После инкубации маркеры Ламбды ДНА/Индиии отделяют 1% гелем агарозы и окрашивают бромидом этидия. Маркеры остаются целыми полосками без размазывания.

отсутствие рназы и латентная рназа
Для проверки на наличие рназы 1 мг рна инкубируется 200 единицами ингибитора рибонуклеазы в течение 4 часов при 37°C.
После инкубации РНК визуализируется как нетронутая полоса на геле агарозы, окрашенном бромадом этидия, для проверки отсутствия видимой рназы.
Для проверки на наличие латентной рназовой активности 200 единиц ингибитора рибонуклеазы денатурируют при температуре 70°C в течение 15 минут и инкубируют 1 мг рна в течение 4 часов при температуре 37°C.
После инкубации РНК визуализируется как нетронутая полоса на геле агарозы, окрашенном бромадом этидия, для проверки отсутствия видимой рназы.

физическая чистота

чистота ≥ 95%, по оценке геля с sds-полиякриламидом с синим окрасом кумасси.

Примечание об использовании

Стандартная рт и in vitro транскрипция использует ингибитор рибонуклеазы в конечной концентрации 1 u/ ul.

порядок