полиаполимераза в препаратах секвенирования следующего поколения (ngs)

полиаполимераза(PAP) является ключевым ферментативным действием, ответственным за добавление поли-А хвоста к 3’ концу молекул РНК. Эта активность играет значительную роль в общей стабильности, транспортировке и трансляции РНК. В рамках NGS, однако, PAP позволяет добавлять A олигонуклеотид к образцам РНК перед секвенированием, чтобы можно было получить данные высокого качества из различных источников РНК.

Значение добавления поли-А хвоста

С добавлением поли-А хвоста к мРНК связано множество преимуществ. Прежде всего, A хвост способствует повышению стабильности молекул РНК против активности рибонуклеаз со стороны экзонуклеаз. Во-вторых, поли-А хвост играет роль в инициации трансляции, способствуя прикреплению рибосомы к мРНК. В случае подготовок NGS мРНК с поли-А хвостом можно легко использовать для более целенаправленного анализа экспрессии генов вместе с вариациями транскриптов, так как они могут быть специально обогащены.

Подготовка образцов NGS

Рабочие процессы NGS включают подготовку образцов РНК, которые включают следующие этапы: обратная транскрипция, конструирование CDNA и амплификация. Также обычно добавляют полимеразу поли-А во время синтеза CDNA, чтобы включить поли-А хвост в окончательные молекулы cDNA. Эта модификация критически важна для амплификации библиотеки и секвенирования, поскольку она увеличивает эффективность этапов, связанных с подготовкой библиотек.

Применения в RNA-Seq

ПАП также очень полезен в приложениях секвенирования РНК (RNA-Seq), потому что он позволяет более эффективно обогащать мРНК с поли-А хвостом. Это помогает захватить более четкую картину транскриптомного уровня изучаемого организма. Таким образом, такое улучшение может помочь в определении дифференциально экспрессируемых генов, альтернативных сплайсинговых событий или даже некодирующих РНК. Более того, включение ПАП в подготовки NGS позволяет получить более многообещающие данные.

Добавление PAP в подготовки NGS может значительно улучшить качество и точность данных секвенирования. Что более важно, по мере продолжения исследований важность PAP для того, чтобы ученые могли исследовать транскриптом, останется значительной.