Inhibitor de ribonuclează, inhibitor de rnază

Inhibitor de ribonuclează recombinant al placentei umane, 40 u/μl

sursa

tulpina de e. coli care exprimă un clon recombinant care poartă o genă inhibitor de ribonuclează din placenta umană.

concentraţie

40 u/μl.

definiție unitate

o unitate este definită ca cantitatea necesară de inhibitor al ribonucleasei recombinantă care inhibează activitatea 5ng a ribonucleasei cu 50%.

Activitatea este măsurată prin inhibarea hidrolizei monofosfatului ciclic de citidină 23 de către ribonuclează a.

buffer de stocare

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% ((v/v) glicerol

depozitare

să fie păstrat la -20°c

controlul calității

absenţa endonucleasei
1 μg de ADN lambda este incubat cu 200 de unități de inhibitor al ribonucleasei timp de 16 ore la 37°c.
după incubație, ADN-ul lambda este vizualizat ca intact pe un gel de agaroză vopsit cu bromură de etidiu pentru a verifica absența endonuclezei vizibile.

absența de nicase
1 μg de pbr322 superînfășurat de tip i este incubat cu 200 de unități de inhibitor al ribonucleasei timp de 4 ore la 37°c.
după incubație, ADN-ul superînfășurat este vizualizat pe un gel de agaroză vopsit cu bromură de etidiu pentru a verifica absența unor tăieturi sau tăieturi vizibile.

absența exonucleasei
1 μg de markeri de ADN lambda/hindiii sunt incubate cu 200 de unități de inhibitor al ribonucleasei timp de 16 ore la 37°c.
După incubație, markerele de ADN lambda/hindiii sunt separate cu gel de agaroză de 1% și vopsite cu bromură de etidiu. Marcătorii rămân în forma benzilor intacte fără a fi acoperite.

absenţa rnazei şi a rnazei latente
Pentru a se verifica prezența activității rnazei, 1 u.g. de rna este incubată cu 200 de unități de inhibitor al ribonucleasei timp de 4 ore la 37°C.
După incubație, ARN-ul este vizualizat ca bandă intactă pe un gel de agaroză vopsit cu bromură de etidiu pentru a verifica absența rnazei vizibile.
Pentru a detecta prezența unei activități latente a rnazei, 200 de unități de inhibitor de ribonuclează sunt denaturate termic la 70°C timp de 15 minute și incubate cu 1 u.g. de rna timp de 4 ore la 37°C.
După incubație, ARN-ul este vizualizat ca bandă intactă pe un gel de agaroză vopsit cu bromură de etidiu pentru a verifica absența rnazei vizibile.

puritate fizică

puritatea este ≥ 95%, apreciată prin gelul sds-poliacrilamidă cu colorat albastru coomassie.

Notă de utilizare

Inhibitorul ribonuclease este activ pe o gamă largă de pH (ph5. 5-9).

ordinea