Inibidor da ribonuclease, inibidor da rnase

Inibidor da ribonuclease da placenta humana recombinante, 40 u/μl

fonte

Estirpe de e. coli que expressa um clone recombinante que transporta um gene inibidor da ribonuclease da placenta humana.

concentração

40 u/μl.

definição de unidade

Uma unidade é definida como a quantidade de inibidor da ribonuclease recombinante necessária para inibir a actividade de 5ng de ribonuclease a em 50%.

A actividade é medida pela inibição da hidrólise do monofosfato ctidina 23-cíclico pela ribonuclease a.

buffer de armazenamento

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% ((v/v) glicerol

armazenamento

armazenar a -20°c

controlo de qualidade

ausência de endonuclease
1 μg de ADN lambda é incubado com 200 unidades de inibidor da ribonuclease durante 16 horas a 37°C.
Após a incubação, o ADN lambda é visualizado intacto num gel de agarose manchado com brometo de etidio para verificar a ausência de endonuclease visível.

ausência de niquase
1 μg de pbr322 de tipo i superenrolado é incubado com 200 unidades de inibidor da ribonuclease durante 4 horas a 37°C.
Após a incubação, o ADN superenrolado é visualizado num gel de agarose manchado com brometo de etidio para verificar a ausência de cortes ou cortes visíveis.

ausência de exonuclease
1 μg de marcadores de ADN lambda/hindiii é incubado com 200 unidades de inibidor da ribonuclease durante 16 horas a 37°C.
Após a incubação, os marcadores de ADN/hindiii de lambda são separados por 1% de gel de agarose e tingidos com brometo de etidio. Os marcadores permanecem como faixas intactas sem manchar.

ausência de rnase e rnase latente
Para testar a presença de actividade da rnase, 1 ug de rna é incubado com 200 unidades de inibidor da ribonuclease durante 4 horas a 37°C.
Após a incubação, o RNA é visualizado como uma banda intacta num gel de agarose manchado com brometo de etidio para verificar a ausência de rnase visível.
Para testar a presença de actividade latente da rnase, 200 unidades de inibidor da ribonuclease são desnaturadas a 70°C durante 15 minutos e incubadas com 1 uG de rna durante 4 horas a 37°C.
Após a incubação, o RNA é visualizado como uma banda intacta num gel de agarose manchado com brometo de etidio para verificar a ausência de rnase visível.

Purificação física

A pureza é ≥ 95%, avaliada por gel de poliacrilamida sds com coloração azul coomassie.

Nota de utilização

A transcrição padrão rt e in vitro utiliza um inibidor da ribonuclease numa concentração final de 1 u/ ul.

ordem