Inhibitory ribonukleazy, inhibitory rnazy

rekombinowany inhibitor ludzkiej rybonukleasy łożyska, 40 u/μl

źródło

szczep e. coli wyrażający rekombinowany klon, który jest nosicielem genu inhibitora ribonukleazy z ludzkiego łożyska.

koncentracja

40 j/μl.

definicja jednostki

jedna jednostka jest zdefiniowana jako ilość rekombinowanego inhibitora ribonukleasy wymagana do hamowania aktywności 5ng ribonukleasy a o 50%.

aktywność jest mierzona poprzez hamowanie hydrolizy monofosforanu cytydyny 23-cyklicznego przez ribonukleazę a.

bufor magazynujący

20 mm hepes-koh ((ph7.6), 50 mm kcl, 8 mm dtt, 50% (v/v) glicerolu

przechowywanie

przechowywać w temperaturze -20°C

kontrola jakości

brak endonukleazy
1 μg lambda DNA jest inkubowane z 200 jednostkami inhibitora ribonukleazy przez 16 godzin w temperaturze 37°C.
po inkubacji lambda DNA jest wizualizowana jako nienaruszona na żelu agarosowym obarwionym bromkiem etydiowym w celu zweryfikowania braku widocznej endonukleasy.

brak nikasu
1 μg pbr322 typu i w superkołowanej formie inkubuje się w 200 jednostkach inhibitora ribonukleazy przez 4 godziny w temperaturze 37°C.
po inkubacji, DNA w zwojach jest wizualizowane na żelu agarosowym obarwionym bromkiem etydiowym w celu sprawdzenia braku widocznych odcięć lub odcięć.

brak egzonukleazy
1 μg markerów lambda dna/hindiii inkubuje się w 200 jednostkach inhibitora ribonukleazy przez 16 godzin w temperaturze 37°C.
po inkubacji markery lambda dna/hindiii są oddzielone 1% żelem agarosowym i barwione bromkiem etydiowym. Markery pozostają nienaruszone bez rozmazania.

brak rnazy i rnazy ukrytej
Aby sprawdzić obecność aktywności rnazy, 1 ug rna jest inkubowane przez 4 godziny w temperaturze 37°C z 200 jednostkami inhibitora ribonukleazy.
po inkubacji RNA jest wizualizowana jako nienaruszony pas na żelu agarosowym obarwionym bromkiem etydiowym w celu zweryfikowania braku widocznej rnazy.
Aby sprawdzić obecność utajonej aktywności rnazy, 200 jednostek inhibitora ribonukleazy jest denaturuje w temperaturze 70°C przez 15 minut i inkubowane z 1 ug rna przez 4 godziny w temperaturze 37°C.
po inkubacji RNA jest wizualizowana jako nienaruszony pas na żelu agarosowym obarwionym bromkiem etydiowym w celu zweryfikowania braku widocznej rnazy.

czystość fizyczna

czystość wynosi ≥ 95%, oceniona w żelu sds-poliacrylamidu z barwieniem niebieskim coomassie.

notatka użytkowania

w zakresie pH (ph5. 5-9). w standardowej transkrypcji rt i in vitro stosuje się inhibitor ribonukleazy w ostatecznym stężeniu 1 u/ ul.

rozkaz