M-Mlv အနောက်ဆုံးပြောင်းလိုသော အချိန်တွင် Cdna ဖန်တီးခြင်းရှိသည့် အရာဝတ္ထု

m-mlv ဆန့်ကျင်ဘက် transcriptase သည် မိုလကျူလာ ဘီယိုလေးဂျီတွင် အလှူရှိ အန်ဇီးဖြစ်ပြီး RNA ကို ကွန်ပလီမင်တဲ့ DNA (cDNA) သို့ ထုတ်လုပ်ခြင်းကို ဆောင်ရွက်ပါသည်။ Moloney Murine Leukemia Virus မှ ထုတ်လုပ်ထားသည်။ ဒီအန်ဇီးသည် ဂိုဏ်းများကို ကလိုန်းခြင်းနှင့် အဆင့်ဆိုင်ရာအတွက် အခြေခံအန်ဇီးဖြစ်ပြီး ဂိုဏ်းအကျိုးသက်ရောက်မှုလေ့လာမှုတွင်လည်း အသုံးပြုသည်။ ဒီအန်ဇီးက ဘာလုပ်ဆိုတာနှင့် ဘာလို့အသုံးပြုသလဲဆိုတာကို သိရင်းနှိပ်လိုက်တာက လက်ရှိ ဘီယိုတက္ကန်ဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းများကို အရှေ့ဆုံးအဆင့်သို့ ယူဆောင်ပေးပါတယ်။

မိုလကျူလာ ဘီယိုလေးဂျီတွင် အသုံးပြုမှု

M-MLV Reverse Transcriptase ရဲ့အသုံးပြုမှုများထဲက အများဆုံးအသုံးပြုချက်တစ်ခုဟာ ဂီန်ဖြင့်ပြသခြင်းလေ့လာမှုအတွက်ဖြစ်ပါတယ်။ ဒါက reverse transcription ပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် mRNA ကို cDNA အဖြစ်ပြောင်းလဲလိုက်တာဖြင့် ဂီန်များရဲ့ပြသအဆင့်ကို quantitative PCR (qPCR) ဖြင့်တိုင်းတာနိုင်ပါတယ်။ ပြီးတော့ ဒီအင်ဇိုင်းကို targeted ဂီန်များရဲ့ cDNA copies ကို plasmid vectors ထဲမှာထည့်ပြီး bacteria သို့မဟုတ် အခြားဘဝရှိအရာများထဲမှာမြှောက်ထားဖို့အတွက်လည်း လိုအပ်ပါတယ်။ ဒါပေမယ့် ဒါဟာ cDNA libraries ပြုလုပ်ခြင်းမှာလည်း အသုံးဝင်ပါတယ်၊ ဒါဟာ ဂိုင်းများရဲ့ပြသသော sequence ကို represent လို့ရတဲ့ inserted cDNA molecules တွေရဲ့ system တစ်ခုဖြစ်ပါတယ်။

အမျိုးအစားနှင့် ကန့်သတ်ချက်များ

M-MLV Reverse Transcriptase သည် အမျိုးအစားခြောက်ခုရှိပါတယ်။ ထိုအပြင်၊ အလျော့ဆိုင်ရာအလုပ်များနှင့် သဘောထားများကို ထိန်းသိမ်းဖို့အတွက် အလွန်အရေးကြီးတဲ့ အလုပ်ဆောင်မှုများကို ပေးပါတယ်။ ဒါပေမယ့်၊ ဒီ enzyme ကို RNA template ထဲမှာ structure တွေရှိနေတဲ့အခါမှာ သက်ရောက်နိုင်ပါတယ်။ ဒီ factor တွေဟာ cDNA synthesis ကို အလုပ်ဆောင်ရာနှင့် quality အရ ဆိုင်းရိမ်စေနိုင်ပါတယ်။ ဒါပေမယ့်၊ ဒီ complexity တွေကို ဖြေရှင်းဖို့အတွက် reaction conditions ကို optimize လုပ်ရန်လိုအပ်ပါတယ်။

နည်းလမ်းများနှင့် ပရိုတိုကောများ

M-MLV Reverse Transcriptase ကို ထိရောက်စွာ အသုံးပြုရန်၊ ပရိုမားများ ရွေးချယ်ခြင်း၊ တုံ့ပြန်မှု အပူချိန်နှင့် ဘဖာ ကုန်ကြမ်းဖွဲ့စည်းမှု စသည့် အချက်များကို အထူးဂရုစိုက်ရမည်။ ပရိုမားများကို အထူးသဖြင့် hairpin loops မရှိဘဲ RNA template နှင့် ချိတ်ဆက်မှုကို အများဆုံးဖြစ်စေရန် ဖွဲ့စည်းရမည်။ အင်ဇိုင်း တုံ့ပြန်မှုအတွက် အထူးသင့်လျော်သော 42°C သည် အထူးသဖြင့် အင်ဇိုင်း လှုပ်ရှားမှုနှင့် တည်ငြိမ်မှု အထူးသင့်လျော်သော အပူချိန်ဖြစ်သည်။ အခြားပစ္စည်းများကို အသုံးပြုခြင်းကတော့ Rnase inhibitors တုံ့ပြန်မှုအတွင်း ပျက်စီးမည့် RNA ကို ထိန်းသိမ်းနိုင်ပါသည်။

အနာဂတ်အလားအလာများ

ဇီဝပညာတစ်ခုကို ထပ်မံဖြင့်လေ့လာသည့်အခါ M-MLV Reverse Transcriptase ကို အသုံးပြုရန်အတွက် ကျွန်ုပ်တို့အား ထပ်မံဆောင်ရွက်စေမည်ဖြစ်သည်။ ယနေ့တွင် ရှိသော နέ့်သော စီးပွားမှုများမှာ အင်ဂျင်နီယာများအား ပြုလုပ်ထားသော အုပ်ချုပ်မှုများဖြင့် ပြောင်းလဲထားသော အင်ဇိမ်းများကို ထုတ်လုပ်ရန် ပါဝင်သည်။ ထပ်ပေါင်း၊ ဒီစီပညာကို ယနေ့ခေတ်ဆက်လက်သုံးပြီး ဆက်လက်လေ့လာသော နည်းလမ်းများဖြင့် ဆက်လက်လေ့လာနိုင်သည့် အခြေအနေများကို ပိုမိုသိရှိနိုင်စေမည်ဖြစ်သည်။

M-MLV Reverse Transcriptase သည် cDNA ကို ဆောင်းပါးများထဲသို့ ထည့်သွင်းရန်အတွက် အရေးကြီးသော အချက်အလက်များကို ပေးဆောင်သည့်အတွက် အမျိုးသားပညာရှင်များ၏ လေ့လာမှုတွင် အခြေခံအရာအချို့ဖြစ်သည်။ ပြဿနာများကို တိုးတက်လာသည်ဟု အားလုံးကို တွေ့ရှိနိုင်သော်လည်း၊ M-MLV reverse transcriptase ၏ အခြေအနေများကို တိုးတက်စေရန်အတွက် နέ့်သော ပညာသင်တန်းများကို ဖြစ်ပေါ်စေရန် အကြံပြုထားသည်။ ထို့ကြောင့် ဂျင်နာများ၏ အကြောင်းအရာများနှင့် အားလုံးကို ပိုမိုသိရှိနိုင်စေမည်ဖြစ်သည်။