ribonuclease inhibitor, rnase inhibitor 40u ul အီလက်ထရောနစ်အက်ဆစ်

Recombinant Human Placenta Ribonuclease inhibitor 40u/μl ကို အသုံးပြုခြင်း

အရင်းအမြစ်

လူ့အိမ်တင်ကနေ ribonuclease inhibitor ဗီဇကို သယ်ဆောင်တဲ့ recombinant clone ကို ဖော်ပြတဲ့ e. coli မျိုးစိတ်ပါ။

စုစည်းမှု

၄၀ ယူနစ်/မီလီလီတာ

ယူနစ်အနက်ဖွင့်ချက်

တစ်ယူနစ်ကို 5ng ribonuclease a ရဲ့ လုပ်ဆောင်မှုကို ၅၀% နှိမ့်ချဖို့ လိုအပ်တဲ့ ပြန်လည်ပေါင်းစပ်တဲ့ ribonuclease inhibitor ပမာဏအဖြစ် သတ်မှတ်ပါတယ်။

cytidine 23-cyclic monophosphate ကို ribonuclease a က hydrolysis ကို တားဆီးခြင်းဖြင့် တိုင်းတာသည်။

သိုလှောင်ရေး ဘူဖာ

20mm hepes-koh ((ph7.6), 50mm kcl, 8mm dtt, 50% ((v/v) glycerol ကို

သိုလှောင်ခြင်း

-၂၀ ဒီဂရီ စင်တီဂရိတ် အပူချိန်တွင် သိုလှောင်ထားပါ

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

endonuclease မရှိခြင်း
lambda DNA 1μg ကို ribonuclease inhibitor 200 unit နဲ့ 37°c မှာ ၁၆ နာရီကြာ စိုက်ပျိုးပေးတယ်။
အပျိုးဖော်ပြီးနောက် မြင်သာတဲ့ endonuclease မရှိတာကို စစ်ဆေးဖို့ ethidium bromide နဲ့ ဆေးခြယ်ထားတဲ့ agarose gel ပေါ်မှာ lambda DNA ကို မပျက်စီးဘဲ မြင်နိုင်အောင် မြင်နိုင်ပါတယ်။

နီကာဇ မရှိခြင်း
Type I supercoiled pbr322 ရဲ့ 1μg ကို ribonuclease inhibitor ယူနစ် ၂၀၀ နဲ့ 37°c မှာ ၄ နာရီကြာ စိုက်ပျိုးပေးတယ်။
အပင်ကို စိုက်ပျိုးပြီးနောက်မှာ မြင်သာတဲ့ အခြစ်အယှက်တွေ မရှိတာကို စစ်ဆေးဖို့ အီသီဒျမ်ဘရိုမီဒနဲ့ ညစ်ညမ်းထားတဲ့ အာဂါရိုဇီ ဂျယ်တစ်ခုပေါ်မှာ အပေါ်ကွင်းထားတဲ့ DNA ကို မြင်နိုင်အောင် မြင်နိုင်ပါတယ်။

exonuclease မရှိခြင်း
lambda dna/hindiii အမှတ်အသား ၁μg ကို ribonuclease inhibitor ယူနစ် ၂၀၀ နဲ့ ၃၇°c မှာ ၁၆ နာရီကြာ စိုက်ပျိုးပေးတယ်။
အပင်ကို စိုက်ပျိုးပြီးနောက် lambda DNA/hindiii အမှတ်အသားတွေကို ၁% agarose gel နဲ့ ခွဲထုတ်ပြီး ethidium bromide နဲ့ ဆေးခြယ်ပါတယ်။ အမှတ်အသားတွေဟာ မလိမ်းဘဲ မပျက်စီးတဲ့ ဘားတွေအဖြစ် ကျန်ရစ်ပါတယ်။

rnase မရှိခြင်းနှင့် latent rnase မရှိခြင်း
rnase လှုပ်ရှားမှုရှိမရှိကို စမ်းသပ်ရန် rnase 1ug ကို ribonuclease inhibitor 200 unit ဖြင့် 37°c တွင် ၄ နာရီကြာ စိုက်ပျိုးပေးသည်။
အပင်ကို စိုက်ပျိုးပြီးနောက်မှာ မြင်သာတဲ့ rnase မရှိတာကို စစ်ဆေးဖို့ ethidium bromide နဲ့ ဆေးခြယ်ထားတဲ့ agarose gel ပေါ်မှာ intact band အဖြစ် RNA ကို မြင်ယောင်ကြည့်တယ်။
rnase လှုပ်ရှားမှုရှိမရှိကို စမ်းသပ်ရန် ribonuclease inhibitor 200unit ကို 70°c တွင် ၁၅ မိနစ်ကြာ အပူပိုင်းမှွဲပြီး 37°c တွင် rna 1ug ဖြင့် ၄ နာရီကြာ စိုက်ပျိုးပေးသည်။
အပင်ကို စိုက်ပျိုးပြီးနောက်မှာ မြင်သာတဲ့ rnase မရှိတာကို စစ်ဆေးဖို့ ethidium bromide နဲ့ ဆေးခြယ်ထားတဲ့ agarose gel ပေါ်မှာ intact band အဖြစ် RNA ကို မြင်ယောင်ကြည့်တယ်။

ရုပ်ပိုင်း သန့်ရှင်းမှု

အသားအရေဟာ ≥95% ဖြစ်ပြီး coomassie blue staining နဲ့ sds-polyacrylamide gel နဲ့ အကဲဖြတ်ထားတယ်။

အသုံးပြုမှု မှတ်စု

ပုံမှန် rt နှင့် in vitro transcription သည် ribonuclease inhibitor ကို 1u/ ul ၏ နောက်ဆုံးအကျပ်အတည်းတွင်အသုံးပြုသည်။

အမိန့်