Ribonuclease Inhibitor, RNase inhibitor 40U ul

recombinant Human Placenta Ribonuclease အိန္ဒိပ်, 40U\/μl

အရင်းအမြစ်

E. coli အမျိုးအစားတစ်ခုသည် human placenta မှ Ribonuclease အိန္ဒိပ် ဂျင်ဖြင့် ပြန်လည်ဖွဲ့စည်းထားသော ကိုပီကို ဖြင့်ဖြစ်သည်။

အရေအတွက်

40 U\/μl.

ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်

Recobinant Ribonuclease အိန္ဒိပ် တစ်ယူနစ်သည် ribonuclease A ၏ လုပ်ဆောင်ချက်ကို 5ng ဖြင့် ၅၀% ကို ကန့်သတ်ရန်လိုအပ်သော ပမာဏဖြစ်သည်။

လုပ်ဆောင်ချက်သည် cytidine 2'3'-cyclic monophosphate ၏ hydrolysis ကို ribonuclease A ဖြင့် ကန့်သတ်ရန်ဖြင့် တွေ့ရှိသည်။

Storage Buffer

20mM HEPES-KOH(PH7.6), 50mM KCl, 8mM DTT, 50%(v\/v) glycerol

သိမ်းဆည်းမှု

အပူ -20°C တွင် ထိန်းသိမ်းပါ

အရည်အသွေးထိန်းချုပ်မှု

Endonuclease မရှိခြင်း
Lambda DNA ၁μg ကို Ribonuclease Inhibitor ၂၀၀ units နှင့် ၃၇°C တွင် ၁၆ နာရီလျှင် လေ့ကျင့်သည်.
လေ့ကျင့်ပြီးနောက်၊ ethidium bromide-stained agarose gel တွင် Lambda DNA ကို Endonuclease မရှိဘဲ ပြင်းပြင်ဆင်ဆင်ရောက်ပြီးဖြစ်ကို သိရှိရန် ရှာဖွေနိုင်သည်.

Nickase မရှိခြင်း
Type I supercoiled pBR322 ၁μg ကို Ribonuclease Inhibitor ၂၀၀ units နှင့် ၃၇°C တွင် ၄ နာရီလျှင် လေ့ကျင့်သည်.
လေ့ကျင့်ပြီးနောက်၊ ethidium bromide-stained agarose gel တွင် supercoiled DNA ကို visible nicking သို့မဟုတ် cutting မရှိဘဲ ပြင်းပြင်ဆင်ဆင်ရောက်ပြီးဖြစ်ကို သိရှိရန် ရှာဖွေနိုင်သည်.

Exonuclease မရှိခြင်း
Lambda DNA/HindIII Markers ၁μg ကို Ribonuclease Inhibitor ၂၀၀ units နှင့် ၃၇°C တွင် ၁၆ နာရီလျှင် လေ့ကျင့်သည်.
လေ့ကျင့်ပြီးနောက်၊ Lambda DNA/HindIII Markers ကို ၁% agarose gel ဖြင့် ခွဲခြားပြီး ethidium bromide ဖြင့် ရောင်ခြယ်သည်။ Markers ကို smear မရှိဘဲ intact bands အဖြစ်သာ ရှိသည်.

RNase နှင့် အပြင်ပြားသော RNase မရှိခြင်း
RNase လုပ်ဆောင်မှုရှိမရှိစစ်ဆေးရန် RNA ၁ မူကို Ribonuclease Inhibitor ၂၀၀ units နှင့် ၃၇° Celsius တွင် ၄ နာရီကြာအထိ ကျန်းမှုဖြင့် ပြုလုပ်သည်
ကျန်းမှုပြီးသောနောက် RNA ကို ethidium bromide-stained agarose gel တွင် ပုံမှန် band အဖြစ် မျှော်လင့်ပြီး visible RNase မရှိခြင်းကို သေချာစွာ စစ်ဆေးသည်
အပြင်ပြားသော RNase လုပ်ဆောင်မှုရှိမရှိစစ်ဆေးရန် Ribonuclease Inhibitor ၂၀၀ units ကို ၇၀° Celsius တွင် ၁၅ မိနစ်ကြာအထိ အပူချိုးဖြင့် ပြောင်းလဲပြီး ၃၇° Celsius တွင် RNA ၁ မူနှင့် ၄ နာရီကြာအထိ ကျန်းမှုဖြင့် ပြုလုပ်သည်
ကျန်းမှုပြီးသောနောက် RNA ကို ethidium bromide-stained agarose gel တွင် ပုံမှန် band အဖြစ် မျှော်လင့်ပြီး visible RNase မရှိခြင်းကို သေချာစွာ စစ်ဆေးသည်

ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ သြဇာမြှင့်

SDS-polyacrylamide gel နှင့် Coomassie blue staining အရ သြဇာမြှင့် ≥၉၅% ဖြစ်သည်

အသုံးပြုခြင်း မှတ်ချက်

Ribonuclease Inhibitor သည် ကျယ်ပြန့်သော pH အကျိုး (pH5.5-9) တွင်လည်ပတ်သည် Standard RT နှင့် in vitro transcription တွင် Ribonuclease Inhibitor ကို နောက်ဆုံးသြဇာ ၁u/ul အဖြစ် အသုံးပြုသည်

အမိန့်