HiFi III M-MLV Reverse Transcriptase (RNase H-)

ထုတ်ကုန်ဖော်ပြချက်

ကျွန်ုပ်တို့၏ HiFi III m-mlv ဆန့်ကျင်ဘက် transcriptase (RNase H-) သည် အဆင့်မြင့်အင်ဇိုင်းတစ်ခုဖြစ်ပြီး အရည်အသွေးမြင့် reverse transcription လျှောက်လွှာများအတွက် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည်။ ဤအင်ဇိုင်းသည် Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) reverse transcriptase ၏ ပြင်ဆင်ထားသောဗားရှင်းဖြစ်ပြီး RNase H လှုပ်ရှားမှုကို မပါဝင်စေရန် ဒီဇိုင်းထုတ်ထားသည်။ ထို့ကြောင့် cDNA ဖွဲ့စည်းမှုအတွင်း RNA ပျက်စီးမှုကို လျှော့ချနိုင်သည်။

အဓိက အင်္ဂါရပ်များ:

• RNase H လုပ်ဆောင်မှုမရှိသော ပြင်ပြင်ထားသော M-MLV reverse transcriptase
• cDNA synthesis တွင် အထူးသဖြင့် သဘောထားခြင်းနှင့် ကုန်သုံးမှုရှိသည်
• ပြည့်စုံ mRNA နှင့် အလျော့တိတ်တိုးမှုအတွက် အကောင်းဆုံး reverse transcription ဖြစ်သည်
• RNA ကို ပိုမိုလျှော့ချထားသည့်အတွက် အကောင်းဆုံး template preservation ရရှိသည်
• RT-PCR buffer conditions အမျိုးမျိုးနှင့် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်
• downstream applications အတွက် high-quality cDNA ဖန်တီးရန် ideal ဖြစ်သည်

အသုံးပြုမှုများ:

• Reverse transcription PCR (RT-PCR)
• sequencing နှင့် cloning အတွက် cDNA libraries ကို synthesis လုပ်သည်
• ဂီန်အက်ဆပ်ရှင်းခြင်းအားလေ့လာခြင်း
• RNA ဗိုင်ရပ်စ်များ၏ တွေ့ရှိခြင်းနှင့် ပမာဏတွေ့ခြင်း
• မကြီးမားသော သို့မဟုတ် အနည်းငယ်သော RNA transcripts များ၏ ထိုးခြင်း
• RNA လေ့လာမှုများအတွက် ပညာရေးနှင့် လေ့လာရေးအခြေစိုက်များ

ငါ့တို့ HiFi III M-MLV Reverse Transcriptase (RNase H-) သည် reverse transcription အperimentများကို လုပ်ဆောင်နေသော သုတေသနပညာရှင်များအတွက် အားကစားရေးဆိုင်ရာ အကျိုးအမြတ်ဖြစ်သည်။ အမြင့်ဆုံး သဘောထားချက်နှင့် RNase H activity မရှိခြင်းဖြင့် RNA templates များကို cDNA အဖြစ် မှန်ကန်စွာ ရေးသားပေးပြီး နောက်ဆုံး molecular biology assays အတွက် သဘာဝပြုသော အခြေခံကို ပေးဆောင်သည်။

ဖော်ပြချက်

MMLV Reverse Transcriptase သည် Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV RT) မှ ကုဒ်လုပ်ထားသော RNA-လွန်ခြင်းအတိုင်း DNA polymerase ဖြစ်ပြီး၊ primer တစ်ခုဖြင့် hybridized ထားသော single-stranded RNA template မှ ပထမဆုံး complementary cDNA strand ကို ထုတ်လုပ်သည်။ MMLV RT သည် single-stranded DNA တွင် hybridized ထားသော primers ကိုလည်း ရွေ့လျှော့ခြင်းပြုသည်။ mRNA template အချို့မှ second strand cDNA synthesis ကို additional DNA polymerase မပါဘဲ ရရှိနိုင်သည်။ ယင်းအား general M-MLV RT နှင့် မတူညီသည်မှာ heat endurance capacity က ပိုမိုတင်းတက်ထားသည်ဟု ဖော်ပြရပါမည်။ 50°C တွင် 100% activity ကို ထိန်းသိမ်းနိုင်ပြီး၊ 55°C တွင်မူ 80% ထက်ပိုသော activity ကိုလည်း ထိန်းသိမ်းနိုင်သည်။

အရင်းအမြစ်

Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase gene ကို clone ထားသော E. coli ၏ recombination ဖြင့် ဖြစ်ပေါ်လာသည်။

အသုံးပြုမှုများ

ပထမဆုံး cDNA synthesis; RT-PCR

အင်္ဂါရပ်များ

• RNase H activity မရှိ: Weak RNase H activity High cDNA yield, full length cDNA ကို ပိုမိုရရှိနိုင်သည်။
• thermoStable: အကောင်းဆုံးတိုက်ရောက်မှုအပူချိန် ၅၀°C ဖြစ်ပြီး အများဆုံးအပူချိန်မှာ ၆၀°C ဖြစ်သည်။ RNA ဒုတိယဖွဲ့စည်းပုံကို ကျွန်းဆိုလိုက်ပြီး reverse transcriptase အperiment ကို လျှော့ချမှုမှာလဲ ပြီးစီးစေသည်။
• အပူချိန်အကျယ်ပြန့်: ၃၇-၆၀°C အတွင်း reverse transcript လုပ်ဆောင်နိုင်ပြီး ၄၂°C-၅၅°C တွင် အမြင့်ဆုံးလုပ်ဆောင်မှု၏ ၈၀% ထက်ပိုသည်။ အသုံးပြုသူများသည် အပူချိန်ကို လွတ်လပ်စွာရွေးချယ်နိုင်သည်။
• အီးက်စ်ပလိုင်းလုပ်ဆောင်မှုကြီး: ဂျင်မျိုးရေးပြောင်းလဲမှုဖြင့် enzyme နှင့် RNA ကြားရှိ binding အင်ပ်ပြားမှုကို တိုးတက်စေသည်။ အီးက်စ်ပလိုင်းလုပ်ဆောင်မှုအမြင့်ကို တိုးတက်စေပြီး quality cDNA ကိုရရှိနိုင်ပြီး cDNA library တည်ဆောက်ရေးအတွက် အဆင်ပြေစေသည်။

ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်

MMLV RT တစ်ယူနစ်သည် oligo(dT)12-18-primed poly(A)n အဖြစ် template အဖြစ်သုံး၍ ၃၇°C တွင် ၁၀ မိနစ်အတွင်း ၁ nmoL မှ dTTP ကို acid insoluble material ထဲသို့ incorporate လုပ်ဆောင်သည်။

အရေအတွက် : ၂၀၀U/μl

ထုပ်ပိုး : Bulk

အစိတ်အပိုင်း : M-MLV (၂၀၀U/μl) ၅xBuffer (DTT ပါဝင်သည်)

သိမ်းဆည်းမှု : -၂၀°C

အမိန့်