HiFi II M-MLV Reverse Transcriptase (RNase H-)

ထုတ်ကုန်ဖော်ပြချက်

ကျွန်ုပ်တို့၏ HiFi II m-mlv ဆန့်ကျင်ဘက် transcriptase (RNase H-) သည် RNA ပျက်စီးမှုအနည်းဆုံးလိုအပ်သော ပြန်လည်အသားပေးလျှောက်လွှာများအတွက် ဒီဇိုင်းဆွဲထားသော အထူးထိရောက်သော အင်ဇိုင်းဖြစ်သည်။ ဤအင်ဇိုင်းသည် Moloney Murine Leukemia Virus (M-MLV) ပြန်လည်အသားပေးအင်ဇိုင်း၏ ပြင်ဆင်ထားသော ဗားရှင်းဖြစ်ပြီး RNase H လှုပ်ရှားမှုမရှိသောကြောင့် cDNA ထုတ်လုပ်မှုအတွင်း RNA ပုံစံကို ပျက်စီးမှုမှ ကာကွယ်ပေးသည်။

အဓိက အင်္ဂါရပ်များ:

• RNase H လုပ်ဆောင်မှုမရှိသော ပြင်ပြင်ထားသော M-MLV reverse transcriptase
• cDNA synthesis တွင် မြင်ကွင်းနှင့် ကုဒ်မှုများ
• ပုံစံ mRNA အတွက် reverse transcription တွင် အသုံးပြုရန် အဆင်ပြေသည်
• ပိုက်ခြင်းအားလျော့ချရန် RNA ကို ပိုကောင်းသော template preservation
• RT-PCR buffer conditions အမျိုးမျိုးနှင့် အကောင်းဆုံးဖြစ်သည်
• downstream applications အတွက် high-quality cDNA ဖန်တီးရန် ideal ဖြစ်သည်

အသုံးပြုမှုများ:

• Reverse transcription PCR (RT-PCR)
• sequencing နှင့် cloning အတွက် cDNA libraries ကို synthesis လုပ်သည်
• ဂီန်အက်ဆပ်ရှင်းခြင်းအားလေ့လာခြင်း
• RNA ဗိုင်ရပ်စ်များ၏ တွေ့ရှိခြင်းနှင့် ပမာဏတွေ့ခြင်း
• မကြီးမားသော သို့မဟုတ် အနည်းငယ်သော RNA transcripts များ၏ ထိုးခြင်း
• RNA လေ့လာမှုများအတွက် ပညာရေးနှင့် လေ့လာရေးအခြေစိုက်များ

ჩင်ဗျားရဲ့ HiFi II M-MLV Reverse Transcriptase (RNase H-) ဟာ reverse transcription experiments လုပ်ဆောင်နေသော သူတို့အတွက် အခြေခံအကျိုးသက်ရောက်မှုတစ်ခုဖြစ်ပါတယ်။ RNase H activity မရှိဘဲ RNA templates တွေဟာ ပျမ်းမျှချင်း ထိန်းချုပ်ထားမှုရှိပြီး ပိုမိုသော်တော့ မှန်ကန်သောနှင့် သေချာသော cDNA synthesis ကို ဖြစ်ပေါ်စေပါတယ်။

ဖော်ပြချက်

MMLV Reverse Transcriptase သည် Moloney Murine Leukemia Virus (MMLV RT) မှ ကုဒ်လုပ်ထားသော RNA-လွန်ခြင်းအတိုင်း DNA polymerase ဖြစ်ပြီး၊ primer တစ်ခုဖြင့် hybridized ထားသော single-stranded RNA template မှ ပထမဆုံး complementary cDNA strand ကို ထုတ်လုပ်သည်။ MMLV RT သည် single-stranded DNA တွင် hybridized ထားသော primers ကိုလည်း ရွေ့လျှော့ခြင်းပြုသည်။ mRNA template အချို့မှ second strand cDNA synthesis ကို additional DNA polymerase မပါဘဲ ရရှိနိုင်သည်။ ယင်းအား general M-MLV RT နှင့် မတူညီသည်မှာ heat endurance capacity က ပိုမိုတင်းတက်ထားသည်ဟု ဖော်ပြရပါမည်။ 50°C တွင် 100% activity ကို ထိန်းသိမ်းနိုင်ပြီး၊ 55°C တွင်မူ 80% ထက်ပိုသော activity ကိုလည်း ထိန်းသိမ်းနိုင်သည်။

အရင်းအမြစ်

Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase gene ကို clone ထားသော E. coli ၏ recombination ဖြင့် ဖြစ်ပေါ်လာသည်။

အသုံးပြုမှုများ

ပထမဆုံး cDNA synthesis; RT-PCR

အင်္ဂါရပ်များ

• RNase H activity မရှိ: Weak RNase H activity High cDNA yield, full length cDNA ကို ပိုမိုရရှိနိုင်သည်။
• thermoStable: အကောင်းဆုံးတိုက်ရောက်မှုအပူချိန် ၅၀°C ဖြစ်ပြီး အများဆုံးအပူချိန်မှာ ၆၀°C ဖြစ်သည်။ RNA ဒုတိယဖွဲ့စည်းပုံကို ကျွန်းဆိုလိုက်ပြီး reverse transcriptase အperiment ကို လျှော့ချမှုမှာလဲ ပြီးစီးစေသည်။
• အပူချိန်အကျယ်ပြန့်: ၃၇-၆၀°C အတွင်း reverse transcript လုပ်ဆောင်နိုင်ပြီး ၄၂°C-၅၅°C တွင် အမြင့်ဆုံးလုပ်ဆောင်မှု၏ ၈၀% ထက်ပိုသည်။ အသုံးပြုသူများသည် အပူချိန်ကို လွတ်လပ်စွာရွေးချယ်နိုင်သည်။
• အီးက်စ်ပလိုင်းလုပ်ဆောင်မှုကြီး: ဂျင်မျိုးရေးပြောင်းလဲမှုဖြင့် enzyme နှင့် RNA ကြားရှိ binding အင်ပ်ပြားမှုကို တိုးတက်စေသည်။ အီးက်စ်ပလိုင်းလုပ်ဆောင်မှုအမြင့်ကို တိုးတက်စေပြီး quality cDNA ကိုရရှိနိုင်ပြီး cDNA library တည်ဆောက်ရေးအတွက် အဆင်ပြေစေသည်။

ယူနစ်အဓိပ္ပါယ်

MMLV RT တစ်ယူနစ်သည် oligo(dT)12-18-primed poly(A)n အဖြစ် template အဖြစ်သုံး၍ ၃၇°C တွင် ၁၀ မိနစ်အတွင်း ၁ nmoL မှ dTTP ကို acid insoluble material ထဲသို့ incorporate လုပ်ဆောင်သည်။

အရေအတွက် : ၂၀၀U/μl

ထုပ်ပိုး : Bulk

အစိတ်အပိုင်း : M-MLV (၂၀၀U/μl) ၅xBuffer (DTT ပါဝင်သည်)

သိမ်းဆည်းမှု : -၂၀°C

အမိန့်